I Congreso
de Investigadores
del PTS

13,14 y 15 de Febrero 2019

Índice general

Capítulo 1
TERAPIAS AVANZADAS

I Congreso de Investigadores del PTS. Granada 13-15 Feb. 2019

Modalidad: Oral

Pompe disease is a rare disorder caused by mutations in the lysosomal acid alpha-glucosidase enzyme (GAA) gene. The absence of GAA produces the accumulation of glycogen in multiple tissues, mainly affecting skeletal muscle, heart and diaphragm. At present, the replacement enzyme therapy (ERT) is the only therapeutic option for these patients. In spite of the highly cost, ERT is effective only for a subset of Pompe patients and it is not a curative treatment. As an alternative, gene therapy could offer a definitive cure by restoring the expression of the GAA gene either by genome addition or by genome edition. Genome addition aim to introduce a new DNA fragment into the patient cells to express the GAA gene, while genome editing aim to correct the normal expression of the endogenous GAA locus. The purpose of this project was to generate different murine cell lines that resemble the phenotype present in Pompe patients’ cells. These cell lines will be used to investigate the efficacy and safety of the different gene therapy strategies. To generate the GAA deficient cell lines, we designed a strategy based on the CRISPR/Cas9 system to disrupt the “ATG” in exon 2. We generated LVs expressing Cas9 and gRNAs targeted near the ATG and transduced Sol8 cells (a murine, muscle cell line). After checking cutting efficacy of the system in the GAA locus by T7 assay, we generated clones from the bulk population. We obtained several clones lacking the ATG; however, these clones still expressed the murine GAA protein (mGAA), although at lower levels. Interestingly, we detected a second “ATG” in exon 2 that is present in frame and that could potentially be used to start the expression of a shorter version of the mGAA.

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Modalidad: Póster

Introduction: Over the past decades, vascular disease has become one of the commonest diseases in the world population. Vascular disease is a result of mainly the inflammation of and the buildup of fatty deposits in the blood vessels. The current therapy being used is vascular replacement that involves autologous implants or synthetic vascular grafts. These however still pose a great challenge in regards to their effectiveness because of the adverse reactions such as restenosis, thrombogenicity or tissue scarring and lack of suitable autologous substitutes in some cases. To prevent this inflammation and to restore normal vascular function, rapid re-endothelialization of the vessel could be one of the ways forward.

Objectives: to create a therapeutic model for vascular regeneration using decellularized arteries and then with new biocompatible polymers, ensure the correct formation of the endothelium layer and in turn prevent the binding of other cell such as smooth muscle cells, fibroblasts and/or platelets

Results and discussion: After the process of decellularization of the arteries using detergent and enzymes, a synthetic polymer was used to enhance the rapid growth of endothelial cells and then using a bioreactor, the arteries were recellularized with endothelial cells. Histological assays using fluorescent and electronic microscopy were then used and it was observed that the arteries maintained their structure after the decellularization and once the endothelial cells were seeded into the arteries, they were able to grow homogeneously. In conclusion, results from this study indicate the vast possibilities we have in using new biocompatible polymers to ensure the steady and fast development of endothelial cells and the prevention of other cell types formation in a decellularized artery to create a recellularized artery that could be used for vascular disease treatment.

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Modalidad: Póster

The three-dimensional (3D) bioprinting of hybrid scaffolds is a promising tool for Tissue Engineering (TE) field. Combination of synthetic polymers that aim to recreate the structure and properties of native tissues together with the favorable microenvironment for cell growth may represent an excellent option for the design of artificial tissues. This study addresses the evaluation of a thermoplastic polyurethane (TPU) 3D printing filament as a novel 3D bioprinting material. We tested the in vitro biocompatibility of this 3D printing TPU by 3D bioprinting adipose tissue-derived human mesenchymal stem cells (MSCs) from infrapatellar fat pad of osteoarthritis (OA) patients in TPU scaffolds. Poly-ϵ-caprolactone (PCL) filament was used as a control material to compare with TPU, since it is considered a gold standard synthetic biomaterial used in 3D bioprinting. TPU scaffolds showed both a compression and shear behavior much closer to that of natural cartilage, and enhanced tribological properties. The proliferative potential and cell viability were analyzed, showing that TPU scaffolds were able to maintain proper proliferative potential and cell viability of MSCs. Finally, no in vivo toxic effects were apparently observed after 21 days after scaffold implantation in mice. We believe that this material can be exploited for the automated biofabrication of artificial tissues with tailorable mechanical properties.

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Modalidad: Oral

Background: Inflammaging is a chronic, asymptomatic, systemic inflammation in aging, in the absence of overt infection (1). The large variety of the stimuli fuelling inflammaging apparently converges on few basic mechanisms and pathways based on innate immunity, such as activation of NF-κB and NLRP3 inflammasome, which are responsible for the production of inflammatory molecules (2). Inflammaging is a highly significant risk factor for both morbidity and mortality in the elderly people and increasing evidences support that this subclinical inflammation during aging is associated with chronic diseases and sarcopenia, which is characterized by loss of strength and muscle mass. On the other hand, extrapineal melatonin is known for its antioxidant activity, its immunomodulating properties and its physiological role on mitochondria (3, 4, 5). Due to its anti-inflammatory and antioxidant properties, we hypothesized that melatonin could be used to improve the symptoms of sarcopenia.

Methodology: To assess the age-related role of innate immunity on the development of sarcopenia and to study the effects of melatonin on this immunosenescent process, 3 and 12 months-old wild type (WT) and NLRP3 deficient (NLRP3-/-) mice were studied. The latter were treated with 10 mg/kg melatonin in the diet for two months, from 10 to 12 months of age. Locomotor activity (total distance, resting time, mean speed, and maximal speed) was studied using a Smart Video Tracking System, and speed and fatigue were tested with a treadmill system (running distance and time of exhaustion). All experiments were conducted in accordance with the University of Granada’s Ethical Committee; the Spanish Protection Guide for Animal Experimentation (R.D. 53/2013), and the European Convention for the Protection of Vertebrate Animals used for Experimental and Other Scientific Purposes (CETS #123).

Results: Results showed that NLRP3-/- mice behaved better than WT mice at the same age in terms of resting time, maximal speed, running distance, and time to exhaustion. In both animal models, administration of melatonin significantly improved all parameters of muscle efficiency, even above the performances measured in 3 months old mice.

Conclusions: It is concluded that NLRP3 exerts a type of brake in the motor activity of mice, which may have important consequences when it is activated during inflammaging. Moreover, we also concluded the high efficacy of melatonin to improve skeletal muscle performance. Both findings can have clinical interest in preventing sarcopenia associated to frailty in aged people.

References:

(1) Schroder K., et al. Science 2010; 327: 296-300

(2) Salminen A., et al. Ageing Res Rev 2008; 7:83-105

(3) Reiter RJ., et al. Cell Biochem Biophys 2001; 34:237-256

(4) Leon J., et al. Life Sci 2004; 75:765-790

(5) Sayed RKA., et al. J Gerontol A Biol Sci Med Sci 2018; 73 (10):1330-1338

Supported in part by grants no. PI16-00519 and CB16-10-00238

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Modalidad: Oral

Introducción

Uno de los materiales más empleados en el diseño de nanopartículas para la vehiculización y guiado de fármacos hasta el lugar de acción son los polímeros biocompatibles. Dentro de este grupo, destaca la poli(épsilon-caprolactona) (PCL) por su excelente capacidad de carga y liberación sostenida de principios activos, y por la versatilidad para su funcionalización y control del destino biológico. Cada vez gana más relevancia la predicción y evaluación del comportamiento in vivo de los nanotransportadores de agentes terapéuticos (fármacos y material genético). Los estudios de hemocompatibilidad constituyen una herramienta muy relevante para este fin.

Objetivo

Desarrollo de una formulación de nanopartículas hemocompatibles de PCL para la liberación sostenida de fármacos en células y tejidos diana.

Metodología

La preparación de las nanopartículas de PCL se basó en el método de disposición interfacial del polímero. Se emplearon las técnicas de espectroscopia de correlación de fotones y de electroforesis para la evaluación del tamaño y carga eléctrica superficial, respectivamente. En el estudio de la hemocompatibilidad de la nanoplataforma se determinó por triplicado la hemolisis, la activación de plaquetas, la activación del sistema del complemento, y el tiempo de recalcificación plasmática. Todos los experimentos se realizaron por triplicado.

Resultados y conclusión

La metodología de formulación permitió la obtención reproducible y con elevado rendimiento (≈ 90%) de nanopartículas con un tamaño ≈ 150 nm, adecuado por ejemplo para la vía de administración parenteral. Las partículas presentaron carga eléctrica superficial negativa en agua (≈ - 9 mV, pH 6). Las nanopartículas de PCL resultaron ser hemocompatibles, pues no se registraron diferencias significativas con los datos del grupo control. Se están desarrollando más estudios para evaluar la biocompatibilidad y biodegradabilidad de este coloide.

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Modalidad: Póster

Background and aims:

Colorectal cancer (CRC) is the third most common cancer in the world whose main treatments are surgical resection with or without adjuvant chemotherapy for less advanced stages. The advanced stages of the disease are essentially treated with chemotherapy. The chemotherapeutic agents currently used for thetreatment of CRC are 5-fluorouracil (5-FU), Oxaliplatin (OXA) and irinotecan (IRI), being used more commonly in combination (eg: FOLFOX, FOLFIRI).

However, conventional chemotherapy involves a series of important side effects such as the generation of multiple drug resistance (MDR) or delivering drugs off-target. Therefore, the use of nanoplatforms as vehicles to reduce these side effects as well as improving the targeting of the drug to its action target represents a great advance in cancer therapy. On the other hand, the great versatility and variety that nanoplatforms present make them a great tool.

This work includes the tests carried out in vitro with a new magnetite nanoparticle (BXY17) functionalized with oxaliplatin (BXY17-O), which has excellent magnetic and targeting capabilities as well as being rapidly internalized by cell lines.

Methods:

For the evaluation of the properties of BXY17 NP, functionalized and not functionalized with OXA, a large set of colon lines, both tumoral (T-84, HCT-15, HT-29, SW480, MC38) and non tumoral (CCD-18) have been used. For its characterization, tests of cytotoxicity, migratory capacity against a magnetic field, uptake,and effect on blood and immune system cells have been carried out.

Results:

The BXY17 NP have shown a great capacity for internalization in the cell lines studied, being observed by electron microscopy inside the cell at only 15 min of exposure. In addition, all cell lines have displayed an excellent dose-dependent migration capacity of NP when exposed to a magnetic field. On the other hand, BXY17 NP doesn’t produce hemolysis in a wide range of doses tested but exhibits an aggregation of the erythrocytes probably due to the absence of cover and although they generate a dose-dependent toxicity in lymphocytes at exposure times of 1h, the viability recovers completely after 12h of exposure. Finally, it’s important to note that BXY17-O NP manages to reduce the IC₅₀ of free Oxa in all cell lines tested.

Conclusion:

The BXY17 NP is presented as an excellent tool thanks to its excellent magnetic capabilities that could reduce the systemic effects caused by the OXA by magnetic guidance to the tumor site, achieving that a greater quantity of the drug reaches the target. In addition, the encapsulation of OXA in NPs results in a reduction of the IC₅₀ of the free drug. On the other hand, the problems observed in the blood and immune system cells could be solved with the addition of a coating that is proposed for future work.

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Modalidad: Oral

After injury, infection or trauma, an acute inflammatory response is activated that can lead to further damage in the host. Restoration of immune homeostasis with a timely coordinated regulation is required, and the identification of endogenous factors that modulate exacerbated immune responses is crucial. In our investigation, we have demonstrated that some endogenous neuropeptides, which participate in the bidirectional interaction and homeostatic functions of the neuroendocrine and the immune systems, are produced during the ongoing inflammatory response. Between them, Cortistatin (CST) a cyclic-neuropeptide related to somatostatin, has been extensively studied by our group. CST is produced by cortical and hippocampal interneurons and also by macrophages and T cells in response to inflammatory and immune stimulation. Although it shares many functions with somatostatin, especially concerning the regulation of hormone secretion and neuronal activities, CST exerts unique functions in the nervous and immune systems. We have described the potent anti-inflammatory activity of CST and its therapeutic effect in many experimental autoimmune models such as collagen-induced rheumatoid arthritis (CIA), inflammatory bowel disease, autoimmune myocarditis, and experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE). In these disorders, the administration of CST drastically reduced the two deleterious components of the disease, the inflammatory and autoimmune responses, and restored long-lasting immune tolerance. In addition, CST has also a neuroprotective role in some neurodegenerative conditions, as showed in the preclinical models of Huntington’s and Parkinson’s disease. Systemic administration of CST deactivated glial cells, decreased neuroinflammation, and favoured an active program of neuroprotection/regeneration. Following this, we also wondered about the role of endogenous CST. Evidence suggests that CST might provide protection against autoimmune and inflammatory pathologies. As expected, immune cells (macrophages, T cells, microglia) isolated from cortistatin-deficient mice showed an exacerbated immune response when stimulated. However, we found that lack of cortistatin surprisingly conferred resistance to systemic inflammatory diseases. Cortistatin-deficient mice were partially resistant to CIA, EAE and other inflammatory disorders, despite showing competent inflammatory/autoreactive responses. This unexpected phenotype was associated with elevated circulating glucocorticoids and an anxiety-like behaviour in cortistatin-deficient mice. Our findings demonstrate that cortistatin plays a critical role in the tuning of the immune responses in health and disease and identify cortistatin as a key player in the bidirectional communication that exists between the neuroendocrine and immune systems. Furthermore, these findings support cortistatina as a novel multimodal therapeutic approach to treat diseases with autoimmune and/or inflammatory components.

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Modalidad: Oral

En los últimos años la utilización de nanopartículas (NPs) en el área de la nanomedicina ha experimentado grandes avances en el tratamiento de diversas enfermedades, tales como cáncer, enfermedades neurodegenerativas, autoinmunes, cardiovasculares, etc. Posiblemente una de las aplicaciones más extendidas en este campo, está relacionada con el terapéutico, donde se utiliza las NPs convenientemente funcionalizadas como agentes de contraste (MRI) o como vehículos transportadores para la liberación controlada de fármacos. Si estas nanopartículas son a su vez magnéticas, posen otros atributos tales como la posibilidad de dirigir el fármaco transportado hasta el órgano diana donde se quiere actuar de una manera más efectiva, evitando efectos secundarios negativos, o pueden servir como agentes de calentamientos. El objetivo de este último, es la elevación de la temperatura de la región local del tumor por medio de las pérdidas magnéticas de las nanopartículas sometidas a un campo magnético alterno, y hacerlo sin dañar el tejido sano circundante. Este enfoque novedoso se denomina “HIPERTERMIA MAGNÉTICA”, y consiste en exponer al tejido tumoral a temperaturas entre (41-46)

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Modalidad: Póster

Introduction: There is increasing evidence that exosomes secreted by mesenchymal stromal cells (MSC) are one of the main mediators of their physiological/therapeutic effects. The immunomodulatory properties of MSCs from bone marrow and adipose tissue have been extensively investigated, few studies focusing on intestinal MSCs (IMSC) and their exosomes have been performed. They could participate both in the development of autoimmune diseases like IBD and also be used as therapeutic tools for treating these conditions. Thus, the aim of the study is to evaluate the effect of different stimuli present in the gut on the expression of immune mediators produced by IMSCs as well as to better characterize the exosomes they secrete.

Methods: IMSCs were isolated with an enzymatic cocktail from resections of intestinal human samples and cultured. At passage 3-5, their phenotype was checked by FACs. IMSCs at passage 7 and 70-80% confluency were treated with different stimuli: (1) LPS (10 ng/mL); (2) poly I:C (1 μg/mL); and (3)TNF-α (3 ng/mL) and IFN-γ (10 ng/mL) during 1 and 24 h. IMSCs without stimulation were used as negative control. After the treatment, the medium was replaced with new free serum medium and 24-48 h later, the supernatant was collected. The expression of immune mediators was analyzed by RT-qPCR, and polarization towards MSC1 and MSC2 phenotypes was assessed.

Results: Cells isolated from the intestinal resections showed a fibroblastic like shape and a mesenchymal phenotype (CD90+, CD73+, CD105+ and CD45-). With regards to immune mediators expression, 1 h and 24 h of stimulation with TNF-α and IFN-γ showed the most promising results - the expression of indoleamine 2,3-dioxygenase (IDO) was significantly increased when comparing it with the negative control. Moreover, this combination did not induce the expression of proinflammatory cytokines such as IL-6 and IL-8. Conversely, LPS (1h and 24 h) and poly I:C (1 h) did not induced the expression of IDO and the expression of IL-8 was induced after 1 hour stimulation with LPS. Poly I:C stimulation for 24 h showed similar results to TNF-α and IFN-γ, unless to a lesser extent.

Discussion / Conclusion: Independently of the stimulation time, TNF-α and IFN-γ can polarize IMSCs towards an anti-inflammatory MSC2 phenotype, as well as 24 h stimulation with poly I:C. It is very likely that the exosomes released by these cells display similar immunomodulatory properties and colud be used for the development of a new therapy for IBD.

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Modalidad: Oral

Coenzyme Q (CoQ) deficiency has been associated with primary defects in the CoQ biosynthetic pathway or to secondary events. In some cases, the exogenous CoQ supplementation has limited efficacy¹. In the Coq9R239X mouse model with fatal mitochondrial encephalopathy due to CoQ deficiency1, we have tested the therapeutic potential of β-resorcylic acid (β-RA), a structural analog of the CoQ precursor 4-hydroxybenzoic acid and the anti-inflammatory salicylic acid. β-RA noticeably rescued the phenotypic, morphological, and histopathological signs of the encephalopathy, leading to a striking and significant increase in the survival. Those effects were due to the decrease of the levels of demethoxyubiquinone-9 (DMQ9) and the increase of mitochondrial bioenergetics in peripheral tissues. However, neither CoQ biosynthesis nor mitochondrial function changed in the brain after the therapy, suggesting that some endocrine interactions may induce the reduction of the astrogliosis, spongiosis, and the secondary down-regulation of astrocytes-related neuroinflammatory genes. Because the therapeutic outcomes of β-RA administration were superior to those after CoQ10 supplementation, its use in the clinic should be considered in CoQ deficiencies.

Bibliography

1 Garcia-Corzo L, Luna-Sanchez M, Doerrier C, Garcia JA, Guaras A, Acin-Perez R, Bullejos-Peregrin J, Lopez A, Escames G, Enriquez JA et al. Dysfunctional Coq9 protein causes predominant encephalomyopathy associated with CoQ deficiency. Hum Mol Genet 22: 1233 - 1248 doi: 10.1093/hmg/dds530 (2013)

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Modalidad: Póster

The three-dimensional (3D) bioprinting allows the generation of cellular constructs where cellular composition, architecture, extracellular matrix components and mechanical properties are controlled. Organoids are a type of 3D constructs that allow to mimic in vitro different tissues, and are defined as multiple self-organizing cell types. The two basic methods for bioprinting organoids are scaffold-based and scaffold-free bioprinting, and their choice depends on several factors such as the tissue to be replicated, cell type, and function to be performed. Organoids represent a great advance for research area, since it allows to have an in vitro model to study developmental biology, a disease model for drugs high-througpout screening, and solves the gap between in vitro and in vivo study models, being able to reduce and even obviate the animal models. Even, in the near future, organoids will allow the application of personalized medicine thanks to the generation of customized constructs for regenerative biomedicine and the design of therapies adapted to each patient.

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Modalidad: Oral

Lipid nanocapsules represent a promising nanocarrier for lipophilic drugs delivery. The surface characteristics of these colloidal particles are determinant in order to provide a controlled and directed delivery on target tissues with specific markers. We report the development of immuno-nanocapsules, in which a specific antibody (Anti-CD44) is conjugated to nanocapsules with the aim of a selective drug delivery to target cells. Specifically, this antibody interacts with the membrane receptor CD44 used as a cell-surface marker for several cancers [1].

A nanocapsule system was prepared by the solvent displacement technique obtaining an oily core surrounded by a functional shell with surface carboxylic groups [2]. Using a chemical method, the specific CD44 antibody has been covalently conjugated with these nanoparticles through the surface groups. A complete physico-chemical characterization of the immuno-nanocapsules was developed confirming the immobilization of antibodies molecules on the colloidal nanoparticles.

Finally, in vitro studies have been carried out by culturing pancreatic tumor cells and pancreatic cancer stem cells with nanocapsules and immuno-nanocapsules loaded with red-nile together with paclitaxel or drugs developed by the research group.

References

[1] L.M. Negi, S. Talegaonkar, M. Jaggi, F.J. Ahmad, Z. Iqbal, R.K. Khar, Role of CD44 in tumour progression and strategies for targeting, J. Drug Target. 20 (2012) 561-573. doi:10.3109/1061186X.2012.702767.

[2] P. Sánchez-Moreno, J.L. Ortega-Vinuesa, H. Boulaiz, J.A. Marchal, J.M. Peula-García, Synthesis and characterization of lipid immuno-nanocapsules for directed drug delivery: Selective antitumor activity against HER2 positive breast-cancer cells, Biomacromolecules. 14 (2013) 4248-4259. doi:10.1021/bm401103t.

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Modalidad: Oral

Sulfide metabolism in mammalian cells mainly consists of the transsulfuration (biosynthetic) and the hydrogen sulfide (H2S) oxidation (catabolic) pathways, being the latter one involved in the mitochondrial energy production through the activity of Sulfide:Quinone Oxidoreductase (SQOR). Recently, we have reported that the levels of SQOR are drastically reduced under severe CoQ deficiency, inducing an alteration in the H2S oxidation pathway (1,2). However, it is unknown how sulfide metabolism responds to supraphysiological levels of CoQ10 after exogenous supplementation. Thus, we have evaluated how supplementation with CoQ10 affects the enzymes of the sulfide metabolism pathway in conditions of mitochondrial dysfunction, sulfur aminoacids availability, and genetic overexpression of SQOR. First, we observed that the levels of SQOR are variable in CI deficient cells; second, supplementation with CoQ10 increases SQOR protein levels and decreases the enzymes of the transsulfuration pathway, i.e. CBS and CSE; third, we proved that the changes in CBS and CSE levels are mediated by SQOR levels because genetic overexpression of SQOR decreases CBS and CSE levels; and fourth, the correlation between the levels of CoQ10 and SQOR protein was confirmed in vivo in liver of c57 mice treated with oral CoQ10 and in the kidneys of Ndufs4-/- mice. These data contribute to the understanding of sulfide metabolism regulation and may have a potential impact in the treatment of diseases with mitochondrial dysfunction or disruption of sulfide metabolism.

(1) Luna-Sanchez, M. et al. CoQ deficiency causes disruption of mitochondrial sulfide oxidation, a new pathomechanism associated with this syndrome. EMBO Mol Med 9, 78-95, doi:10.15252/emmm.201606345 (2017).

(2) Ziosi, M. et al. Coenzyme Q deficiency causes impairment of the sulfide oxidation pathway. EMBO Mol Med 9, 96-111, doi:10.15252/emmm.201606356 (2017).

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Modalidad: Póster

Background and aims: Colorectal cancer is one of the most prevalent cancers in the world. Patients in advanced stages often develop metastases that require chemotherapy and usually show a poor response, have a low survival rate and develop considerable toxicity with adverse symptoms. Gene therapy may act as an adjuvant therapy in attempts to destroy the tumor without affecting normal host tissue. The bacteriophage E gene has demonstrated significant antitumor activity in several cancers, but without any tumor-specific activity. The use of tumor-specific promoters may help to direct the expression of therapeutic genes so they act against specific cancer cells. Methods: We used the carcinoembryonic antigen promoter (CEA) to direct E gene expression (pCEA-E) towards colon cancer cells. CACO-2, HT29, HCT-116, SW480, RKO and T-84 cell lines and the mice colon cancer MC-38 cell line were tested. CEA activity was detected by luciferase assay. Transfection was performed using FUGENE6 reagent. Proliferation study was carried our using dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) . In vivo study was carried out in female C57BL/6 mice with tumors induced by subcutaneous injection of MC-38 cells. Results: pCEA-E induced a high cell growth inhibition of human HTC-116 colon adenocarcinoma and mouse MC-38 colon cancer cells in comparison to normal human CCD18co colon cells, which have practically undetectable levels of CEA. In addition, in vivo analyses of mice bearing tumors induced using MC-38 cells showed a significant decrease in tumor volume after pCEA-E treatment and a low level of Ki-67 in relation to untreated tumors. These results suggest that the CEA promoter is an excellent candidate for directing E gene expression specifically toward colon cancer cells. Conclusion: New gene therapy strategies are being developed to treat cancers. The use of tumor-specific promoters are being developed may help to direct the expression of therapeutic genes so they act against specific cancer cells. We have proved that carcinoma embryonic antigen is an excellent tumor-specific promoter to direct E gene expression towards colon cancer cells but not to normal colon cells, inducing cell growth inhibition, Ki-67 expression reduced and decrease of tumor volume. We propose the system of the E gene under CEA post-transcriptional as a novel gene therapy strategy for the treatment of colorectal cancer.

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Modalidad: Póster

Introducción Los coloides magnéticos han adquirido una gran importancia en Nanotecnología debido a sus importantes aplicaciones biomédicas. Existen una serie de compuestos ferromagnéticos, tales como la magnetita o maghemita, que han sido empleados para el diagnóstico como agentes de contraste en resonancia magnética de imagen (RMI), y con fines terapéuticos (hipertermia, y guiado magnético de fármacos y material genético).

Objetivos Se pretende estudiar la variación del tamaño y carga eléctrica superficial (potencial zeta) de partículas de maghemita cuando éstas son sometidas a diferentes condiciones de tratamiento y conservación.

Metodología Las nanopartículas de maghemita se obtuvieron mediante un procedimiento bien conocido de oxidación de núcleos de magnetita (previamente obtenidos mediante co-precipitación química). Las partículas así obtenidas se sometieron a una o dos estabilizaciones ácidas, conservando los núcleos de óxido de hierro a temperatura ambiente o en frío (4 ^oC), y en dispersión acuosa con o sin agente tensioactivo. La evolución temporal del tamaño de partícula se determinó mediante espectroscopia de correlación de fotones, mientras que la carga eléctrica superficial se estimó mediante electroforesis.

Resultados y conclusión Los resultados obtenidos muestran que las condiciones de estabilización no parecen tener un efecto significativo sobre el tamaño y potencial zeta de las partículas. No obstante, las condiciones de conservación en frío sí aseguran el mantenimiento del menor tamaño posible de los agregados de nanopartículas, durante el período de conservación evaluado. Se han definido las mejores condiciones de trabajo para la preparación de un coloide de maghemita con potencial aplicación en Biomedicina.

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Modalidad: Póster

Cancer Stem Cells (CSCs) are a group of cells within the tumor niche that are responsible for phenomena such as relapse, metastasis and drug resistance. That is why these cells are an important target of study for new therapies against cancer. Irregular expression of several miRNAs has been associated to tumour progression. It has been described that miRNAs are implicated in regulation of CSCs. Herein a new antitumoral therapy based on nanoparticles has been developed by conjugation of anti-miRNAs sequences to the nanoparticles and checking their effect on CSCs. A malignant melanoma cell line (Mel1) has been choosen as cellular model. It is known that miRNA-21 is overexpressed in this cell line, been miRNA-21 responsible for CSCs not entering into apoptosis making them immortal. Obtained results show that these nanoparticles are efficiently uptaken by CSCs and the conjugation of anti-miRNA to nanoparticles has been achieved with high efficiency. Addittionally, these anti-miRNA-loaded nanoparticles have an apoptotic effect on the CSCs of the Mel1 melanoma cells.

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Modalidad: Póster

Malignant Melanoma is one of the most aggressive skin cancers with an incidence that increases every year. It is highly resistant to chemotherapy and has a high capacity to metastasize with the contribution of cancer stem cells (CSCs) in these processes. Nowadays, we are looking for a way to understand better how CSCs works in order to discover molecular targets able to identify and eliminate these aggressive subpopulations. The objective of this study contributes to the optimization and comparison of a conditioned medium described by the group of JA Marchal, that allows an enrichment and better characterization of the cancer stem cells. This method involves the culture of mesenchymal cells isolated by adipose tissue which are known to play an important role in contributing to the establishment of the tumour microenvironment. In this study, a non-ezimatic protocol to obtain conditioned medium is proposed to improve the isolation of mesenchymal cells in a non-stressing conditions. In addition we have tested the efficacy of the conditioned medium to enrich CSCs from a melanoma primary cell line obtained directly from a melanoma patient (provided by Biobank of Andalucía).

Capítulo 2
ONCOLOGÍA

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Modalidad: Póster

Lung cancer is the most prevalent cancer type worldwide (11.6%) as well as the deadliest in Spain (20.2% of all cancer deaths) (Globocan 2018).

Next generation sequencing technologies (NGS) developed in the last decades have revealed new genes whose expression is aberrant in several tumors. Among these genes, those codifying for SWI/SNF chromatin remodeling complex’s subunits stand out with a 20% of mutation rate throughout all cancer types (Kadoch et al. 2013). But… what is this SWI/SNF remodeling complex and what is its specific role in cancer.

SWI/SNF is an epigenetic factor whose main function lies on the remodeling of the chromatin structure through ATPase activity (Wilson et al. 2011), and enables transcription factors bind to DNA. As a result, it has been stablished as a noteworthy gene expression regulator. From the several subunits which this complex is composed, its catalytic subunit (BRG1) and its DNA-binding subunits ARID1A and ARID1B represent the most SWI/SNF’s mutated genes in lung adenocarcinoma (NSCLC).

To understand the role of ARID1A and ARID1B in cancer, we have generated ARID1A/ARID1B and ARID1B inducible knockout mice. ARID1B single KO mice have not yet shown any tumor development sign (9 months post recombinase deletion). Nevertheless, ARID1A/ARID1B double K.O die in less than 30 days.

Besides the analysis of ARID1A/ARID1B KO mice, to decipher the in vivo phenotype, we will take two in vitro approaches: (I) study of mouse embryonic fibroblasts (MEFs) isolated from double knockout pregnant females, and (II) study the tumor suppressor role of ARID1B and ARID1A in MEFs expressing oncogenic versions of KRAS. For this, we will eliminate ARID1A and ARID1B using CRISPR/Cas9 from MEFs in which the human KRAS WT, G12C and G12D versions have been introduced.

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Modalidad: Oral

I. Introduction

Chromatin remodeling complexes play an important role during the first stages of gene expression regulation and they have been described as altered in cancer and other diseases. Specifically, the SWI/SNF complex is a chromatin remodeling complex that modifies the DNA-histone interactions. There is consistent evidence that shows the importance of the SWI/SNF complex as a tumor suppressor and how mutations in some of their subunits, especially the catalytic subunit BRG1/SMARCA4, are present in lung cancer.

However, despite all these observations, the specific role of the SWI/SNF complex in tumor development remains unknown and there is still need for further research on this topic.

II. Objectives

1) To show a global perspective of the mutational status of the different chromatin remodeling complexes in patients with lung adenocarcinoma.

2) To correlate the mutational status and gene expression data from different lung adenocarcinoma cell lines regarding the SWI/SNF complex subunits.

3) To analyze alterations in cell lines in which the expression of SWI/SNF proteins is altered but no mutations are found in the affected genes.

III. Methodology

Mutational frequencies from all the subunits of different families of chromatin remodeling complexes were calculated using the data extracted from the Genomic Data Commons database.

We performed a correlation of mutation data with gene expression data of the 29 subunits of the SWI/SNF complex in 39 lung adenocarcinoma cell lines. The mutation data was obtained by performing targeted NGS, whereas the gene expression data were generated by automatized RT-qPCR.

Two lung adenocarcinoma cell lines lacking SMARCA4 expression (H322 and H2087) were also analyzed by PCR in order to check any chromosomal reorganizations. In addition, a methylation-specific PCR was done in order to analyze the possible hyipermethylation of the promoter of SMARCA4.

IV. Results

The SWI/SNF complex showed a higher mutation rate than the rest of chromatin remodeling complexes in lung adenocarcinoma. We obtained a higher mutation frequency in the subunits SMARCA4, ARID1A, ARID2 and ARID1B.

Among the SWI/SNF complex subunits with truncating mutations, the most affected by the loss of gene expression were the same four subunits aforementioned. There was a correlation between the truncating mutations and the low expression of the affected genes. Homozygous deletions caused a loss of expression of the SMARCA4 gene in the cell lines H2030 and A549.

The PCR results showed that there was no chromosomal reorganization of the SMARCA4 gene in the cell lines H322 and H2087. On the other hand, the results from the methylation-specific PCR could not confirm the hypermethylation of the promoter of SMARCA4 in the H322 cell line.

I Congreso de Investigadores del PTS. Granada 13-15 Feb. 2019

Modalidad: Póster

Cancer is currently one of the leading causes of death in developed countries, together with cardiovascular diseases. On the continuous research for new anticancer therapies, nanoparticles (NPs) have appeared as an attractive toll due to their characteristics. Some of the characteristics which make them advantageous as drug carriers are their high drug encapsulation efficiency, drug protection against degradation, controlled drug release or specific tumour targeting [1]. We have synthesized different kinds of NPs, which will be classified as Liquid Lipid NPs (LLNs) due to the liquid state of the lipids used at body temperature. We have developed LLNs made of olive oil, and different shell compositions, like hyaluronic acid (HA), Human or Bovine Serum Albumin protein (HSA o BSA) and poloxamer triblock non-ionic surfactants. Hyaluronic acid may enhance intestinal absorption of an oral drug delivery nanosystem, due to its strong interaction with intestinal mucus protein mucin, and at the same time allows for direct targeting towards cancer stem cells (CSCs) overexpressing CD-44 receptor. Poloxamer non-ionic surfactants and serum albumins avoid the formation of protein corona, thus protecting NPs from immune system clearance. Albumins also enhance intracellular intake, probably due to specific receptors in the external cell membrane [2]. Curcumin has been used as hydrophobic drug model to study the encapsulation efficiency of NPs. In all cases, curcumin solubility in water has been increased over 100 times. All synthesized NPs have sizes under 200 nm and are highly monodisperse. ζ-potential changes from negative values over -40 mV, to values close to 0 mV, depending on the shell composition. Such changes on shell composition also led to changes on mucoadhesive properties of LLNs. They are stable over time at 4^oC and at physiological conditions [2]. NPs are excellent alternatives to solubilize hydrophobic compounds, like some of the chemotherapics used currently in clinic. This fact, together with stability and versatility on shell composition and surface characteristics, give us a pool of interesting nanocarriers for the study of new strategies in drug administration.

Acknowledgement: This work has been supported by the MAT2015-63644-C2-1-R and MAT2015-63644-C2-2-R projects (MINECO/FEDER).

[1] J.K. Patra, G. Das, L.F. Fraceto, E.V.R. Campos, M. del P. Rodriguez-Torres, L.S. Acosta-Torres, L.A. Diaz-Torres, R. Grillo, M.K. Swamy, S. Sharma, S. Habtemariam, H.-S. Shin, Nano based drug delivery systems: recent developments and future prospects, J. Nanobiotechnology. 16 (2018) 71. doi:10.1186/s12951-018-0392-8.

[2] F. Galisteo-González, J.A. Molina-Bolívar, S.A. Navarro, H. Boulaiz, A. Aguilera Garrido, A Ramírez, J.A. Marchal. Albumin-covered lipid nanocapsules exhibit enhanced uptake performance by breast-tumor cells, Colloids and Surfaces B. Biointerfaces 165 (2018) 103-110. https://doi.org/10.1016/j.colsurfb.2018.02.024.

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Modalidad: Póster

Magnetotactic bacteria are a very interesting kind of bacteria due to a specific organelle that they have: magnetosomes. This organelle consists on a magnetic crystal (magnetite) enveloped by a lipid bilayer membrane that allow them to passively align along the magnetic field of the Earth. These organelles are presented as a promising tool in clinic due to their characteristics for their use as hyperthermia agents and drug nanocarriers, among others. Because of the difficulty to scale up magnetosome production, researchers have developed alternatives, such as the in vitro production of biomimetic (magnetosome-like) magnetite nanoparticles (BMNPs) using magnetosome proteins. In our case, we use specifically the heterologous protein MamC because is the most abundant protein in this organelle and the nanoparticles produced show novel physical and chemical characteristics compared to other magnetic nanoparticles. Among these novel characteristics, it is important to point out: (1) the larger magnetic moment per particle and size that allow the BMNPs to respond very effectively to an external magnetic field while behaving as no magnetic in the absence of an external magnetic field, which prevent agglomerations, and (2) new surface properties that facilitate their functionalization by electrostatic interaction, thus making the adsorption-release of the relevant molecule pH-dependent. In spite of the progress made, these BMNPs still have an important drawback, which is their colloidal stability. One way to improve this stability, as well as to improve biocompatibility is to cover them with lipids to form magnetoliposomes. In the present work, magnetoliposomes were produced by following the Preparation of Hydrophilic Compound or Small Molecule-Encapsulating DRV Liposomes Protocol, in which phosphatidylcholine is dissolve, then evaporated forming a thin film and finally mixed with the nanoparticles suspension, forming these molecules. These magnetoliposomes are evaluated as hyperthermia agents in the context of an alternative cancer treatment. In this study, hyperthermia is understood as the temperature rise due to the rotation of the nanoparticles under the influence of an alternate magnetic field. The magnetoliposomes produced in the present study reached the hyperthermia temperature to induce tumor cell apoptosis (44^oC) in less than 30 seconds and were able to maintain it for, at least, 30 minutes. These results demonstrate the potential use of these magnetoliposomes as hyperthermia agent in alternative cancer treatments.

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Modalidad: Póster

INTRODUCCIÓN: La radioterapia (RT) es un procedimiento muy extendido en el tratamiento de tumores de mama, cabeza, cuello y piel (1). La dermatitis derivada de RT puede afectar al 95% de los pacientes (2). Las radiaciones ionizantes provocan daños en el ADN de las células basales de la epidermis provocando una respuesta inflamatoria mantenida por citoquinas como IL-1(3). Esto altera la función barrera de la piel dando lugar a una mayor pérdida de agua transdérmica derivando en sequedad y descamación de la piel. (4). Debido a la respuesta inmune mantenida, se produce una dilación de los capilares provocando un enrojecimiento de la piel (eritema) (5) y sensación de picazón (purito). Los síntomas pueden afectar a la calidad de vida de los pacientes (6) llevando incluso a la suspensión temporal o definitiva del tratamiento disminuyendo así su eficacia. Previamente se ha usado EGF en tratamiento tópico de radiodermitis (7) debido a su efecto regenerativo de las células epiteliales (8).

OBJETIVO: Evaluar la eficacia de Radio Cream® de Inves Biofarm como medida profiláctica en el tratamiento contra la radiodermitis cuyo principal componente es el Sh-Oligopeptide-1 (EGF).

MÉTODOS: Se reclutaron 20 pacientes de cáncer en tratamiento radioterápico con dosis entre 42, 70 y 72 Gy. Radio Cream ^® se aplicó dos veces al día durante el tratamiento de RT (7 semanas) y durante un mes tras RT. Se realizó un control médico y de recogida de datos cada semana y al mes de haber finalizado el tratamiento radioterápico. En casa sesión, se evaluó la toxicidad de la piel, por parte del personal médico, mediante los criterios del National Cancer Institute (NCI) (9) y se clasificó según el grado de dermatitis en una escala de 0 a 4, siendo 0 sin dermatitis y 4 ulceración. Además, se evaluó el grado de purito por el paciente mediante el criterio de NCI en una escala de 0 a 4, siendo 0 sin purito y 4 intenso. También se llevó a cabo una valoración de 0 a 10 por el paciente del producto como absorción, aroma, frescor, comodidad de administración y tolerabilidad.

RESULTADOS: El análisis de los datos se ealizó sobre 17 de 20 pacientes ya que 3 tuvieron que dejar el tratamiento. Al finalizar el tratamiento se aprecia un porcentaje del 5%, 65% y 30% para la dermatitis grado 0, 1, 2 respectivamente, sin observarse grado 3 ni 4. Un 70% de los pacientes no presentaban prurito y el 30% grado 1. La puntuación media fue de 8,38.

CONCLUSIÓN: Podemos estimar que la crema Radio Cream^® se ha mostrado como una opción válida para la prevención de radiodermatitis. Puede impedir o retrasar la aparición de la toxicidad cutánea, contribuyendo al mantenimiento de la calidad de vida de los pacientes y permitir completar el tratamiento radioterápico.

Palabras clave: Radiodermitis, Eritema, Sh-Oligopeptide-1, dermatitis

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Modalidad: Póster

Introduction

A promising new breakthrough in the field of lung cancer, which is one of the leading causes of death worldwide, is the discovery that the RNA binding motif 10 (RBM10) gene is mutated in a significant percentage of lung cancer. Several studies have categorized RBM10 as tumor suppressor with an essential role in regulating alternative splicing events, specifically the exon exclusion process. While previous studies have focused on RBM10 regulation of protein coding genes, little is known about its role in circular RNAs (circRNAs) formation. CircRNAs are covalently closed non-coding RNAs with recent but relevant importance in gene expression. These circRNAs are synthetized during the exon exclusion in splicing and it is known that there are RNA-binding proteins that modulate this process. Therefore, RBM10 can have an important role in it.

Methodology

RBM10 mutational data was obtained by exon sequencing of 70 lung adenocarcinoma patient samples and 39 LUAD cell lines. Transient and permanent restoration models were established in lung adenocarcinoma cells deficient for this protein. Colony assays and resazurin assays were performed to test proliferation capacity.

In addition, RBM10 knockdown models were also developed in wild-type RBM10 lung cancer cell lines. Resazurin assays were performed to test proliferation capacity. RBM10 expression was measured by RT-qPCR and western-blotting and circRNA expression was analyzed in by RT-qPCR using home-made divergent primers.

Results

The mutational rate of RBM10 in both LUAD cell lines and tumor samples was found to be higher than previously reported, being 12.8% for cell lines and 8.6% for patient samples. The tumor supressor role of RBM10 was confirmed with transient and permanent restoration models established in a RBM10-deficient LUAD cell lines. RBM10-expressing cells formed significantly less colonies and were less viable. In comparison to the control, RBM10-expressing cells had lower levels of the circ0013958, which is a circRNA known to act as tumor promoter in lung cancer. Moreover, another circRNA, circ0043256, also well-known as a tumor suppressor in this type of tumors, was found to be underexpressed upon RBM10 knockdown. Furthermore, cells had better viability upon RBM10.

Overall, this preliminary study confirms that the expression of tumorigenic circRNAs can be modified in accordance with the proliferation changes upon RBM10 overexpression or knockdown in lung cancer cell lines. Therefore, this research could support the hypothesis that changes in RBM10 expression may cause variability in circRNAs formation leading the tumorogenic process.

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Modalidad: Póster

Background and aims: Colon cancer is one of the three most common cancers worldwide and the first in Spain. Due to its late diagnosis, it is necessary to develop new strategies to improve its treatment, especially in the case of advanced stages. In this case, magnetoliposomes (MLPs) may be a good choice due to their ability to transport different types of molecules such as antitumor drugs, in addition to having magnetic properties that can be used for diagnosis, vehiculization of nanoformulations and to treat cancer by hyperthermia.

Methods: MLPs of phosphatidylcholine and magnemite (γ-Fe2O3) were synthesized and their toxicity was evaluated in human tumor cells (T84) and non-tumor cells (CCD18) from colon tissues, and blood cells (erythrocytes, lymphocytes and macrophages), as well as tests of cellular uptake and migration. Blood samples from healthy donors were used for in vitro blood cell toxicity tests. Erythrocytes and lymphocytes were isolated from blood and exposed to different concentrations of MLPs, for the assay of hemolysis and cytotoxicity using the CCK-8 kit respectively. To evaluate a possible toxicity in macrophages due to its high phagocytic activity, the cell line RAW 264.7 was used and the CCK-8 kit. The toxicity in the rest of cell lines was evaluated by the colorimetric assay of sulforrodamine B. For the cell uptake expertiments, TEM and Prussian blue staining were used on tumor and non-tumor colon cells treated with MLPs. The iron concentration inside cells was determined quantitatively by the ferene-s-assay. Finally, the magnetic behavior of MLPs was tested in vitro by the induction of the migration of a cell suspension treated with MLPs and exposed to a magnetic field.

Results: No toxicity was observed in any of the blood cells tested, being therefore safe for intravenous administration. In the case of both tumor and non-tumor human colon lines, no of toxicity was found. For the cell internalization assays, we were able to verify that the MLPs were internalized efficiently within cells from the first half hour, showing the maximum internalization peak at 24 hours. The TEM images allowed us to study the internalization in more detail showing the MLPs inside the cells surrounded by membrane, suggesting an input mechanism mediated by endocytosis and/or macropinocytosis. Once inside the cells, these MLPs showed a good magnetic behavior, being able to induce the migration of the tumor cells in suspension.

Conclusion: MLPs showing a high biocompatibility in the in vitro tests, in addition to being well internalized maintaining their magnetic properties. These results suggests that MLPs could be good future vehicles for antitumor drugs in the colon cancer treatment.

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Modalidad: Póster

INTRODUCCIÓN

Según la AECC, el cáncer colorrectal (CCR) es el cáncer más frecuente diagnosticado en la población española (15% del total) y a menudo puede pasar desapercibido en estadíos tempranos por la ausencia de sintomatología, siendo en estadíos avanzados cuando aparecen signos de alarma. Por este motivo, muchos de los proyectos de investigación que se llevan a cabo dentro del Sistema Sanitario Público de Andalucía (SSPA) están encaminados hacia el desarrollo de sistemas de detección precoz del CCR. El Biobanco en red del SSPA gestiona gran parte de estos proyectos atendiendo las necesidades de los investigadores y ofreciéndoles una amplia variedad de muestras biológicas.

OBJETIVO

Adecuación del uso de los circuitos asistenciales ya establecidos en los hospitales y centros de salud como por ejemplo, el de detección precoz de CCR, para reclutar donantes de muestras para investigación.

MATERIALES Y MÉTODOS

La Junta de Andalucía, a través de la Consejería de Salud, ha puesto en marcha el programa de detección precoz de CCR para una población diana con edades comprendidas entre los 50 y 69 años que se basa en la realización de una prueba sencilla y no invasiva que analiza la presencia de sangre oculta en heces (SOH). El Hospital Universitario Torrecárdenas de Almería (HUT) ha instaurado un circuito asistencial para atender los casos de aquellos pacientes con SOH positiva. Concretamente, es en el Hospital de Día Médico del HUT donde se citan a estos pacientes y se les prepara para realizarles una colonoscopia y confirmar si la muestra de SOH positiva es indicativa o no de CCR.

Actualmente, el nodo Almería de investigación del Biobanco del SSPA se encuentra gestionando un proyecto de investigación cuyas muestras biológicas proceden, en gran parte, de los pacientes reclutados gracias a la existencia del circuito asistencial mencionado. La Unidad de Gestión Clínica (UGC) de Aparato Digestivo del HUT juega un papel imprescindible ya que se encarga de organizar las citas de los pacientes, llevar a cabo las exploraciones pertinentes y, junto con Anatomía Patológica, establecer el diagnóstico definitivo.

RESULTADOS Y CONCLUSIONES

A lo largo de los últimos dos meses, el Hospital de Día Médico, el nodo Almería del Biobanco y la UGC de Aparato Digestivo del HUT han mantenido una estrecha comunicación en cuanto al circuito de cribado de CRR se refiere. De 29 pacientes citados en ese periodo de tiempo, 22 han sido reclutados como donantes para muestras de investigación (3 no cumplieron criterios de inclusión en el estudio, 2 no acudieron a la cita y 2 negaron su participación en el proyecto).

El 76% de participación indica un éxito en la metodología de reclutamiento aprovechando los circuitos asistenciales ya instaurados. Además, la implicación de los profesionales de distinta índole (técnicos, médicos, enfermeros…) permite una mayor difusión de la actividad investigadora tanto a nivel local como nacional e internacional en el ámbito sanitario.

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Modalidad: Póster

Background and aims: Glioblastoma multiforme is the worst prognosis brain tumor with a median overall survival from 12 to 15 months with chemo and radiotherapy. Its first line of treatment comprise temozolomide +/- radiotherapy. However, its second line of treatment is not well defined. Bevacizumab, an antiangiogenic, is often used in second line of treatment with a low percentage of responses. The objective of this study is to expose our experience with bevacizumab in glioblastoma in order to define a possible predictive marker of response.

Methods: We obtained 22 patients from 2010 and 2017 that were treated with bevacizumab as second line of treatment. We classyfied glioblastomas in several groups depending of immunohistochemical characteristics: primary (classical, proneural and mesenchymal) and secondary. Classical were defined as p53 positives or/and EGFR amplificated. Proneural presented p53 loss or mutated and were negative for mesenchymal markers. Mesenchymal were defined as p53 negatives and positives for mesenchymal markers (vimentin and/or S100). Glioblastomas with rabdoid or sarcomatoid properties were also included as mesenchymal ones. We obtained the values of response and analyzed them with SPSS 22.

Results: The overall rate response (ORR) to bevacizumab in our cohort of patients was 27% excluding pseudoresponses. There were 6 patients with mesenchymal phenotype (5 responders, 1 non responder). 9 with classical (9 non responders), 4 with proneural (4 non responders) and 4 secondary glioblastomas (1 responder, 3 non responders). The Chi-Square value for the relationship between mesenchymal phenotype and response to bevacizumab is 14,437 and P value is 0,002.

Conclusion: According to the results, mesenchymal phenotype could be a predictive factor of response to bevacizumab in relapsed glioblastoma. This fact could help to improve the management of glioblastoma in second line.

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Modalidad: Póster

Introducción: El diseño de nanotransportadores de agentes terapéuticos (fármacos y material genético) solventa en la actualidad una de las limitaciones más preocupantes de la farmacoterapia: una escasa interacción con la diana farmacológica. Quizás una de las nanoestructuras más prometedoras es la constituida por partículas de óxido de hierro plenamente embebidas en una matriz orgánica, ej. de tipo polimérico. Gracias al guiado magnético de este tipo de coloides se logra maximizar la fracción de dosis administrada que alcanza el lugar de acción. Dentro de la formulación de estos nanosistemas, resulta muy importante la validación de técnicas analíticas que contribuyan a la caracterización de la capacidad de carga de agente terapéutico. La presente investigación pretende determinar si la electroforesis puede ser una herramienta útil con este fin. A modo de ejemplo, la técnica se aplicó a la evaluación de la incorporación del antitumoral Cisplatino en nanocompuestos maghemita/poli(D,L-lactida-co-glicolida) (PLGA).

Metodología: Mediante una metodología reproducible de emulsificación/evaporación del disolvente, se obtuvieron las nanopartículas (núcleo/recubrimiento) magnéticas con un tamaño medio de 280 nm. Se aplicó la técnica de electroforesis a la evaluación de la incorporación del agente antitumoral en la matriz y en la superficie de las partículas, determinando los valores de potencial zeta de los nanocompuestos en función del pH y fuerza iónica.

Resultados y conclusión: La técnica de electroforesis permitió comprobar que la incorporación de Cisplatino se producía en la matriz de las nanopartículas, cuando la carga de este principio activo se acometía mediante absorción (incorporación en la matriz). Además, esta técnica resultó de elevada utilidad para pronosticar una pobre carga de fármaco cuando la metodología de incorporación era mediante adsorción (en la superficie de partículas ya formadas). La electroforesis se erige como una técnica analítica complementaria a otras ampliamente utilizadas y válidas en la cuantificación de la carga de principios activos en nanotransportadores biodegradables, como la espectrometría UV-Vis o la cromatografía líquida de alta resolución.

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Modalidad: Póster

Background: Cisplatin (CDDP) is the treatment of choice for most head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) patients. However, the high incidence of chemoresistance and its many side effects limit the clinical usefulness of CDDP as an anticancer treatment. The objective of this study was to evaluate the existence of any synergism between melatonin with CDDP.

Materials and Methods: The dose-dependent effects of melatonin were analysed in cisplatin-treated Cal-27 and SCC-9 tongue cell lines. Cells were maintained in DMEM medium, supplemented with 10% FBS at 37 ^oC in a humidified atmosphere of 5% CO2 and 95% air. Cells were treated with melatonin (100, 500 and 1000 μM) alone or in combination with 10 μM CDDP. To analyze the treatment effect, we performed clonogenic assays and we determined apoptosis by flow cytometry, proliferation by MTT method, mitochondrial respiration with SeaHorse, ROS production by DCFH-DA, levels of antioxidant enzymes by WB and GSH/GSSG levels. The results were analysed with GraphPad Prism 6 software.

Results: Melatonin produces an increase of the mitochondrial mass and mitochondrial respiration in HNSC cells treated with CDDP, being more significant in Cal-27 rather than SCC-9 cell line. At the same time, melatonin induces an increment of ROS level without increases the antioxidant enzyme activity. Therefore, the increase of oxidative stress levels, produced by melatonin treatment, entails the increase of the cytotoxic effects of CDDP in vitro.

Conclusion: High melatonin concentrations potentiate the cytotoxic effect of CDDP in head and neck human cancer in vitro.

Fernández-Gil B, et al. Plos One 2017; 12: e0174474.61-173

Abdel Moneim AE, et al. Int J Mol Sci 2017; 18(5). doi: 10.3390/ijms18051003

Shen YQ, et al. J Pineal Res 2018; 64(3). doi: 10.1111/jpi.12461

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Modalidad: Póster

INTRODUCCIÓN: El cáncer de mama es una de las enfermedades más incidentes entre la población femenina. Según datos del NCI, aproximadamente el 12,4% de las mujeres serán diagnosticadas con cáncer de mama en algún momento de su vida. Esto hace indispensable abrir nuevas vías de investigación, como es el estudio de los exosomas para su uso clínico en cáncer de mama. Los exosomas son nanovesículas de entre 30 y 100 nm compuestas de una bicapa lipídica y generados por endocitosis de segmentos de la membrana plasmática. La utilidad de los exosomas se relaciona con el hecho de que se pueden encontrar prácticamente en todos los fluidos biológicos, y, debido a su contenido, que incluye una gran cantidad de moléculas bioactivas. Los exosomas pueden constituir una valiosa fuente de biomarcadores de aparición, progresión y pronóstico del cáncer, así como indicadores de eficacia del tratamiento.

MATERIAL Y MÉTODOS: Búsqueda bibliográfica en Pubmed de los términos “breast cancer” y “exosome” en los últimos 13 años, limitando la búsqueda a artículos originales y descartando estudios cuyo desarrollo fuera únicamente experimental.

RESULTADOS: Tras descartar los artículos que no encajaban con el objetivo de esta revisión, utilizamos un total de 59 artículos en los cuales se realiza aislamiento exosomas en muestras de pacientes con cáncer de mama.

CONCLUSIONES: El estudio de exosomas en cáncer de mama es fundamental ya que juegan un papel importante en el proceso metastásico, además de haberse relacionado con la resistencia de las células tumorales al tratamiento. Tienen un futuro prometedor como herramienta de uso cínico ya que, al ser biomarcadores, pueden ser utilizados para diagnóstico, pronóstico y como marcadores del progreso de la enfermedad. Por otra parte, poseen una posible aplicación terapéutica de gran utilidad: el transporte de sustancias a dianas específicas. Aún hay que seguir explorando este campo, que es relativamente nuevo, y realizar estudios con un mayor tamaño muestral, ya que los estudios clínicos suelen contar con un número de muestras limitado.

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Modalidad: Póster

Introducción: Las células madre cancerosas (CMCs) se consideran como una de las fuentes principales de la heterogeneidad que caracteriza a cualquier tumor. Esta pequeña subpoblación se caracteriza por la relativa quiescencia, longevidad, la progresión lenta del ciclo celular y la alta resistencia a la radiación y fármacos citotóxicos, lo que finalmente explica la metástasis y la recaída. Además, para prevenir la recidiva del cáncer, se requieren nuevas estrategias terapéuticas efectivas contra las CMCs. La hemooxigenasa-1 (HO-1) se ha relacionado con la progresión y la resistencia a la terapia en el cáncer colorrectal (CCR). En este estudio examinamos el papel de HO-1 en la regulación de la subpoblación de CMCS en CCR.

Material y Métodos: Se utilizó un modelo in vitro con dos líneas celulares: HCT-116 +/+ (p53 tipo salvaje) y HCT-116 p53 -/- (p53 mutado). Las CMCs fueron aisladas por la técnica enzimática de la tripsinización diferencial. El número de esferas se determinó mediante microscopía óptica 48 horas después de la sobreexpresión de HO-1. Además, el área de las esferas fotografiadas se midió utilizando el software OLYMPUS cell Sens Entry 1.17 (LEAD Technologies).

Resultados: Las esferas formadas por la línea celular HCT16 +/+ eran generalmente compactas, destacando el tamaño de las esferas formadas por la subpoblación TS1 en los tres casos (control, mock y sobreexpresión). Además, la sobreexpresión de HO-1 parece acentuar estas observaciones. La relación de diámetro de esferas / número de esferas en la subpoblación TS1 disminuyo a las 48 horas y aumento a las 72 horas en HCT16 +/+. Sin embargo, en el caso de HCT116 -/-, el número de esferas aumento, pero se observo menos volumen por esfera, especialmente en la línea celular que sobreexpresaba HO-1. En este caso, la relación de diámetro de esferas/número de esferas muestra diferencias a las 48 y 72 horas después de la sobreexpresión.

Conclusión: La sobreexpresión de HO-1 induce la desdiferenciación independiente de p53 en el CCR.

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Modalidad: Póster

Introducción: Las células madre cancerosas (CMCs) se consideran como una de las fuentes principales de la heterogeneidad que caracteriza a cualquier tumor. Esta pequeña subpoblación se caracteriza por la relativa quiescencia, longevidad, la progresión lenta del ciclo celular y la alta resistencia a la radiación y fármacos citotóxicos, lo que finalmente explica la metástasis y la recaída. Además, para prevenir la recidiva del cáncer, se requieren nuevas estrategias terapéuticas efectivas contra las CMCs. La hemooxigenasa-1 (HO-1) se ha relacionado con la progresión y la resistencia a la terapia en el cáncer colorrectal (CCR). En este estudio examinamos el papel de HO-1 en la regulación de la subpoblación de CMCS en CCR. Material y Métodos: Se utilizó un modelo in vitro con dos líneas celulares: HCT-116 +/+ (p53 tipo salvaje) y HCT-116 p53 -/- (p53 mutado). Las CMCs fueron aisladas por la técnica enzimática de la tripsinización diferencial. El número de esferas se determinó mediante microscopía óptica 48 horas después de la sobreexpresión de HO-1. Además, el área de las esferas fotografiadas se midió utilizando el software OLYMPUS cell Sens Entry 1.17 (LEAD Technologies). Resultados: Las esferas formadas por la línea celular HCT16 +/+ eran generalmente compactas, destacando el tamaño de las esferas formadas por la subpoblación TS1 en los tres casos (control, mock y sobreexpresión). Además, la sobreexpresión de HO-1 parece acentuar estas observaciones. La relación de diámetro de esferas / número de esferas en la subpoblación TS1 disminuyo a las 48 horas y aumento a las 72 horas en HCT16 +/+. Sin embargo, en el caso de HCT116 -/-, el número de esferas aumento, pero se observo menos volumen por esfera, especialmente en la línea celular que sobreexpresaba HO-1. En este caso, la relación de diámetro de esferas/número de esferas muestra diferencias a las 48 y 72 horas después de la sobreexpresión. Conclusión: La sobreexpresión de HO-1 induce la desdiferenciación independiente de p53 en el CCR.

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Modalidad: Póster

Colorectal cancer (CRC) is the third most common cause cancer in the world [1]. Despite advances in treatment by surgery, radiotherapy, and chemotherapy the morbidity of the disease has not decreased enough. Cancer stem cells (CSC’s), a subpopulation of cells within tumors that drive growth and recurrence [2] and it is characterized, besides others, by relative quiescence, slow cell cycle progression, which finally accounts for metastasis formation and local relapse after long periods of dormancy [3].

There is strong evidence that differentiated cells and CSC communicate with the host via miRNAs among others. Due to the difficulty of the direct detection of subpopulations of CSCs in tumor, the identification of miRNAS in liquid biopsies may be decisive for monitoring these subpopulations and their involvement in the resistance and relapse of the disease [4]. A correct diagnosis is essential for adequate, specific and effective treatment which encompasses one or more modalities such as surgery, and/or radiotherapy, and/or chemotherapy.

The objetive of the study is to identify and select miRNAs characteristics of CSCs in patients with several CRC stages and evaluate biomarkers efficacy to predict response to treatment, resistance and disease recurrence in CRC patients. The methodology to follow was firstly CSC’s isolation from established human colorectal cancer cell lines and miRNAs isolation from this cells and patient samples (healthy tissue, tumoral tissue and blood). We select 8 miRNAS and analyses by qPCR. Our results evaluate with the Kruskal-Wallis equality-of-populations rank test shows a variability with non casual distribution, with a significative p value; The Hochberg comparison evidence difference with statistical significance if compare healthy tissue and blood and if compare tumor tissue and blood; student’s t test was applied shows a major expression of two miRNAs in tumor tissue and healthy tissue. Applying the Kruskal-Wallis and dividing the patients in two groups, for presence or absence of metastasis we observed that one miRNA in blood is significantly associated with the metastasis with a significative p value, data confirmed also from the correlation matrix, with a p value statistically significant. Due to our first results we could suggest that circulating miRNAs detected in serum or plasma are promising markers in CRC.

REFERENCES:

1. Zhou J, et al. The effect and clinical efficacy of lienal polypeptide injection combined with FOLFOX chemotherapy regimen in colon cancer patients. Oncol Lett. 2016 Nov

2. Al-Hajj et al, Prospective identification of tumorigenic breast cancer cells. Proc Natl Acad Sci U S A. 2003 Apr

3. Hovinga KE et al. Inhibition of notch signaling in glioblastoma targets cancer stem cells via an endothelial cell intermediate. Stem Cells. 2010

4.M Murtaza, et al. Non-invasive analysis of acquired resistance to cancer therapy by sequencing of plasma DNA. Nature. 2013

I Congreso de Investigadores del PTS. Granada 13-15 Feb. 2019

Modalidad: Oral

Background: Cancer cells have some special features that give them the ability to change and resist different types of treatments. These changes are produced by modifications in the mitochondrial bioenergetics, that is, a switch in the metabolism. These advantages consist in the so-called Warburg effect. Cancer cells depend on glycolysis instead of oxidative phosphorylation to get the energy necessary to proliferate and to survive. Thus, a treatment against this mechanism would control cancer spread. Melatonin in normal cells improves the mitochondrial function by scavenging oxidative stress and increases the cell survival. As mitochondrion is a therapeutic target in cancer cells, we wanted to know how melatonin affects the mitochondria of these cells.

Materials and Methods: The effects of high concentrations of melatonin (100 μM, 500 μM, and 1500 μM) were evaluated in Cal-27 and SCC-9 cell lines of tongue cancer. Cells were cultured in DMEM supplemented with 10% FBS at 37^oC in a humidified atmosphere of 5% CO2 and 95% air. Also, the effects of 1500 μM of melatonin in normal oral keratinocytes (NOKs) as a control of normal cells. Keratinocytes were cultured in Keratinocyte Medium supplemented with 1% Oral Keratinocyte Growth and 1% of penicillin/streptomycin solution at 37^oC in a humidified atmosphere of 5% CO2 and 95% air. Cells were treated with melatonin for 1, 3 and 5 days. The following parameters were analysed: proliferation, apoptosis, mitochondrial mass, electron microscopy, mitochondrial respiratory capacity, glycolityc capacity, ROS production (DCFH-DA), activity of antioxidant enzymes (GPx, GRd and SOD) and metabolomics study. The results were analysed with GraphPad Prism 6 software.

Results: The results showed that melatonin induced a switch in the cancer cell mitochondria, inducing a mitochondrial metabolism. Oncostatic effects of melatonin are due to a switch to aerobic mitochondrial metabolism that increased the ROS production, inducing cancer cell apoptosis and a decrease in the cell proliferation. However, the effect of melatonin in SCC-9 cells was less significant than in Cal-27 cells. Also, melatonin doesn’t affect normal cells.

Conclusion: Mitochondrial changes induced by melatonin lead to a metabolic switch in cancer cells inducing cellular dead but doesn’t affect normal cells.

Fernández-Gil B, et al. Plos One 2017; 12: e0174474.61-173

Abdel Moneim AE, et al. Int J Mol Sci 2017; 18(5). doi: 10.3390/ijms18051003.

Shen YQ, et al. J Pineal Res 2018; 64(3). doi: 10.1111/jpi.12461

I Congreso de Investigadores del PTS. Granada 13-15 Feb. 2019

Modalidad: Póster

Chromatin remodelling complexes are structures capable of regulating gene expression through changes in the conformation of chromatin. These include the SWI/SNF complex (SWItch/Sucrose Non Fermentable), which acquires diverse regulation functions in cell differentiation, cell adhesion, cell cycle, DNA repair and tumour suppression. Mutations in its subunits have been linked to cancer and other neuropathological diseases with intellectual disability. Among the most mutated subunits in these diseases the ARID1A and ARID1B DNA binding subunits stand out. ARID1B is especially important in the development of neuropathies, in which the Coffin-Siris Syndrome and the Autism Spectrum Disorder are included. Recently, its participation in crucial processes of embryonic development has also been observed, especially those related to the organogenesis of the nervous system. In this work, we describe the role of ARID1B during pregnancy by crossing ARID1B heterozygous knockout (KO) mice (ARID1B+/-) and studying the expression of ARID1B in the resulted embryos. The embryos were extracted with different degree of development and their ARID1B expression was compared through the X-Gal technique. Both, the individuals selected for the crosses and the embryos obtained, were genotyped by PCR. The studied embryos include wildtype individuals (ARID1B+/+), ARID1B heterozygous KO individuals (ARID1B+/-) and ARID1B homozygous KO individuals (ARID1B-/-). We observed that ARID1B is expressed in encephalon and spine cord and we proved the embryonic lethality produced by the lack of ARID1B, as no ARID1B-/- mouse was born from the crosses. For everything mentioned above, we demonstrate that ARID1B has an essential role in embryonic development, especially in the formation of the nervous system.

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Modalidad: Póster

Nowadays, cancer is one of the most feared diseases due to its high death rate and the absence of a cure. The lack of an effective treatment against this disease is not only a consequence of its huge heterogeneity (both between malignancy types and between different patients with the same malignancy), but also due to the fact that we ignore the answer of the question of how cancer originates. Among the proposed models to explain the development of a malignancy, the hierarchical model, in which a healthy stem cell becomes a cancer stem cell that is the start point of the primary tumour, is the most widely accepted by the scientific community. Nevertheless, this model fails to explain several experimental observations such as the cancer stem cells (CSCs) location in the edges of a primary tumour mass or the differences between primary and metastatic tumours of the same type of malignancy. Moreover, increasing evidence shows that the CSC phenotype is not a rigid state and that it can be acquired by non-stem cancerous cells as postulates by dynamic model. In this context, we propose a new model of cancer development, based on the dynamic model and emphasizing the changing nature of CSC population, which explains these observations that are not well explained by hierarchycal model and which opens new interesting therapeutic opportunities in the field of cancer medicine.

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Modalidad: Póster

Insulin-like growth factor-II messenger RNA (mRNA)-binding protein-3 (IMP-3) expression has been found to correlate with thick, high-stage tumor, predicted poorer overall recurrence-free and distant metastasis-free survivals in some type of human melanoma. Objective: To evaluate the effect of radiotherapy and the Mesenchymal Stem Cell (MSC) treatment of human melanoma in a mouse xenograft model on their tumorogenic and metastatizing capacity, assessing the morphological changes and immunohistochemical expression of IMP3 and other molecules related to tumor prognosis. Material and methods: A375 and G361 human melanoma cell lines were inoculated into NOD/SCID mice (n=64). The following groups: control (n=8), treated with MSC (n=8), treated with MSC plus radiotherapy (n=8) and treated with radiotherapy (n=8) were established. On tissue matrices (TMA) Different morphological parameters and the immunohistochemical expression of factors related to proliferation (Ki-67) and prognosis (IMP-3, E-cadherin and N-cadherin) were assessed. Results: Most of the morphological and immunohistochemical parameter studied show statistically significant differences between two cell lines. The A375 cell line induced the formation of metastases, while G361 cell line induced tumors but not metastases. IMP-3 related in xenografted human melanoma with greater aggressiveness. IMP-3 immunohistochemical expression is significantly correlated with cell proliferation measured by expression of Ki-67, number of metastases, and inversely with the loss of expression of adhesion molecules. Combined treatment with MSC plus RT significantly reduced tumor size (p=0.001) and modified the immunohistochemical expression of proliferation (Ki-67) and prognostic marker IMP3. Conclusions: Combination treatment with MSC plus RT modifies the immunohistochemical expression of the molecules related to cellular proliferation (Ki-67), facilitation of the metastatic process (adhesion molecules), and prognosis (IMP-3).

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Modalidad: Póster

Background and aims: Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) is one of the most aggressive tumor types, showing dramatically poor survival rates. Surgical resection is the only curative option for these patients, however, most of them have locally advanced or metastatic disease at the time of diagnosis. Therefore, the best strategy for improving the prognosis is the early detection. Unfortunately, currently available biomarkers do not provide reliable sensitivity and specific values for population screening. This situation highlights the urgent need to find effective diagnostic biomarkers with potential clinical utility. In the last decades, gene expression profile using microarrays has been widely used for this purpose, providing large amount of data. Nevertheless, the utilization of different microarray platforms often limits the use of multiple datasets from independent experiments. Integrative meta-analysis can significantly improve the reliability and robustness of differentially expressed gene detection. Herein, we aimed to develop a meta-analysis by integrating gene expression datasets generated from two different microarray platforms in order to identify potential biomarkers in PDAC.

Methods: The present meta-analysis included expression data from 18 and 36 PDAC patients obtained by the Affymetrix and Illumina platforms, respectively, as well as from 18 healthy controls. These datasets were integrated using the empirical Bayes method (ComBat) to avoid bias between the platforms. After this integration, those differentially expressed genes were finally identified by using the statistical programming language R.

Results: Our meta-analysis showed that 5 genes were commonly identified within the individual analyses by both platforms. In addition, our approach revealed 28 new novel genes (gained genes) that were only identified as differentially expressed in the meta-analysis. Several of these genes play important roles in altered pathways in cancer, such as cell proliferation, angiogenesis, and immunity among others.

Conclusion: The proposed integrative approach represents a useful tool in the discovery of biomarkers, being especially valuable when the population size is limited, improving the statistical power. Our meta-analysis has revealed novel differentially expressed genes that may play an important role in PDAC and could be potential biomarkers for this disease.

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Modalidad: Oral

Cancer stem cells (CSCs), a small cell population with stemness characteristics, are responsible for tumour initiation, metastasis and cancer recurrence. However, the involvement of tumor microenvironment is crucial during tumorigenesis and in the maintenance and support of CSCs populations. Tumor microenvironment is composed of tumor cells and non-tumor cells such as mesenchymal stem cells (MSCs). The recruitment of MSCs to the tumor is an essential process that provides a microenvironment with immuno suppressive properties, and with the capacity to promote angiogenesis, metastasis, and thus supporting cancer cell proportion and proliferation. To further explore the role of MSCs on cancer development and CSCs, in our study we have analyzed how human MSCs-derived conditioned medium (CM) affect colon and melanoma CSCs enrichment and maintenance. Results strongly suggest that MSCs secretome selects and maintains subpopulations with high expression of CSCs surface markers and ALDH1 activity, higher sphere formation capacity and low proliferation rates with G1 phase arrest. In addition, CSCs grown in CM-MSCs notably retain in vivo these properties as demonstrated the tumorigenic capacity, and the overexpression of pluripotency genes, ALDH1 activity and superficial CSCs markers. The characterization of secreted proteins presents in CM-MSCs revealed that four cytokines (IL12, IL23, IL6 and IL8/CXCL8) and seven growth factors (EGF, FGF, HGF, GMCSF, MSCF, VEGF-A and PIGF-1) are directly linked to CSCs enrichment reported. Further analyses revealed that the combination of just IL6 and HGF is enough to provide cancer cells with better stemness properties. In conclusion, this results evidence that growth factors and cytokines secreted by MSCs can induce the enrichment of CSCs. Moreover, this study provides a novel cytokine combination that allows the culture of CSCs subpopulations during long time periods, improving the conventional methodology for enrichment and CSCs culture. The novel cell culture medium described can be applied in different sectors, (i) from basic science for drug screening and CSCs biomarkers, (ii) to clinical applications such as in vitro diagnostic medical device that allows the culture of CSCs from the patients for subsequent analysis and to detect possible recurrence or diagnostic markers, and (iii) for implement a personalized medicine. This in turn is the crucial first step for biological and clinical studies with the goal to establish new strategies against CSCs survival.

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Modalidad: Póster

Background and aims: Lung cancer is the type of cancer with the highest mortality rate worldwide. Paclitaxel (PTX), an antimitotic drug, is widely administered for the treatment of choice for this type of cancer and other solid tumours. However, PTX has many limitations and is associated with many undesirable effects like neutropenia, neurotoxicity or hypersensitivity reactions. In this work a new type of polymeric nanoparticles of lactic and glycolic acid (PLGA) loaded with this drug for the treatment of lung cancer is proposed to solve these limitations.

Methods: Proliferation assays with sulforhodamine B in two lung tumor cell lines, A549 and LL2, were performed in order to compare the effect of free PTX and NPs loaded with this drug (PLGA-PTX). Cancer stem cells (CSCs) from A549 cell line were isolated and characterized and cell viability analysis was performed after treatment with free PTX and PLGA-PTX NPs. Multicellular tumour spheroids (MTS) from A549 and LL2 were generated and treated with PTX, PLGA-PTX and blank NPs at the IC50 dose of free PTX. MTS growth was monitored with imaging microscopy and the apoptosis induced was analyzed by a TUNEL assay. Finally, Immunocompetent C57BL/6 mice bearing lung tumor were used to in vivo studies to evaluate the tumor volume differences and survival with the treatments of free PTX and PLGA-PTX NPs.

Results: The results obtained in proliferation assays showed significant dose reduction IC50 with NP-PTX up to 3.63 and 2.69 times lower in A549 and LL2, compared to free PTX. No inhibition was observed in the growth of any cell lines with blank nanoparticles. In addition, PLGA-PTX NPs increased the antitumor activity of PTX in CSCs at low doses. Treatment with PLGA-PTX NPs also increased apoptosis and significantly reduced the volume of the tumorspheres derived from A549 and LL2 cells by up to 36% and 46.5%, respectively. Finally, in vivo treatment with PLGA-PTX NPs showed a greater decrease in tumor volume (44.6%) in immunocompetent mice compared to free PTX (24.4%) and without increasing the toxicity of the drug.

Conclusion: In short, these promising in vitro results obtained suggest that PLGA NPs provide a potential strategy as a mechanism for PTX encapsulation and could allow increasing the therapeutic index of this drug.

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Modalidad: Póster

In recent years, nanotechnology has paved the way for the development of new diagnostic and therapeutic platforms. In cancer therapy, the overexpression of specific receptors on tumour cells has been related to malignancy. Nowadays, tumour cells can be monitored using nanotechnology by the conjugation of a fluorophore that allows in situ detection by flow cytometry and confocal microscopy. However, there is a novel technique, mass cytometry, that combines flow cytometry with mass spectrometry, and by the use of heavy metals, becoming a more sensitive technique than flow cytometry. As a proof of concept, a novel nanodevice was developed, conjugating EGFR specific antibody to polystyrene nanoparticles in order to be selectively uptaken by cells which overexpress EGFR. This overexpression has been associated with reduced survival, metastasis and poor chemosensitivity. The simultaneous conjugation of a fluorophore (carboxyfluorescein) or a metal (Europium) and the antibody made able to track the nanoparticles by flow cytometry, confocal microscopy and mass cytometry. The main advantage of using antibodies-conjugated NPs is that the properties as high sensitivity and specificity for biotargets will be additional to the nanoparticle properties resulting in a system showing greater stability and higher cellular uptake, and improves the efficiency of the nanoparticle therapeutic. The nanodevice’s functionality was validated using various lung cancer cell lines with different levels of expression of EGFR.

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Modalidad: Oral

Malignant melanoma is a highly aggressive form of skin cancer, responsible for 80% of skin cancer deaths, and whose incidence continues to increase worldwide at a rate greater than any type of cancer. Among the factors contributing to its high lethality are the lack of early symptoms, the rapid propensity of metastasis to the lymphatic system and other distant organs, the lack of accurate biomarkers for early diagnosis, and the lack of effective chemotherapies. It has recently been established that these properties may be in part attributed to Cancer Stem Cells (CSCs), a relatively small proportion of cells within the tumor mass, responsible for tumor origin, growth and progression. Diagnosis of malignant melanoma remains challenging and it is therefore important to discover biomarkers and develop methods that can sensitively detect this neoplasia at metastatic stages. In this context, serum biomarkers are easy to check and exosomes represent a novel source of non-invasive biomarkers. The aim of this study was to identify novel melanoma CSCs markers in exosomes which could be used as diagnosis and prognosis biomarkers of malignant melanoma. For this goal, a primary melanoma cell population enriched in CSCs has been characterized and the metabolome of exosomes isolated from cell culture media has been analysed. Exosomes were isolated from ultracentrifugation and their metabolomic profile was analysed through high resolution mass spectrometry. Here it is reported, for the first time, significant differences on the metabolomic profile of exosomes derived from melanoma CSCs as compared with the population of differentiated tumor cells. Furthermore, we have found metabolomic differences between serum-derived exosomes from melanoma patients and healthy controls including some of the differential metabolites previously seen in cell lines. The metabolomic characterization of exosomes sets an open door for the discovery of prognosis and diagnosis biomarkers of malignant melanoma for basic science, clinical or translational focus.

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Modalidad: Póster

Genome editing has enriched our understanding of mechanisms of the human pathology. Genome editing took a significant advance with the recent development of the CRISPR-Cas9 technology. CRISPR is an acronym for: Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats and it is an adaptation of a prokaryotic functional system. It uses a single guide RNA to direct Cas9 activity to a specific part of the genome, therefore, this system can be used for gene editing and regulation.

Cancer is a genetic disease where some DNA-damaged cells begin to divide without stopping and spread into surrounding tissues. Interestingly, in some tumors there is a dependency of a single oncogenic activity (oncogene addiction). This phenomenon indicates that mutations in key oncogenes (driver mutation) are able to drive carcinogenesis and maintain the tumor phenotype. Suggestively, if we can prevent or disrupt these mutations, we can difficult carcinogenesis or damage an established tumoral phenotype. We seek out for using Crispr-Cas9 technology to target driver mutations and evaluate its therapeutic and preventive value. To develop a proof of concept, we focused on KRAS gene which represents the most frequently mutated family across all cancer types. About one-third of human lung adenocarcinomas, the most prevalent form of lung cancer, carry KRAS mutations. Most of these mutations are located on codon 12 and the mutation KRAS c.34G>T (G12C) is the most frequent one. Disruption of this mutation with a specific gRNA-guided-CRISPR-Cas9 decreases viability and proliferation of mutated cells such H23. The generation of a transgenic mouse expressing Crispr-Cas9 designed to target these mutations will allow us to test the potential cancer-resistant phenotype.

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Modalidad: Póster

Objetivo: valorar la eficacia de un programa mixto de terapia ocupacional y mHealth de 12 semanas de duración para mejorar la calidad de vida de mujeres supervivientes de cáncer de mama.

Material y métodos: se realizó un ensayo clínico controlado y aleatorizado con 71 mujeres supervivientes de cáncer de mama entre enero de 2016 y abril de 2018 en la Facultad de Ciencias de la Salud, de la Universidad de Granada. Los criterios de inclusión fueron: a) estadio de cáncer de mama I-IIIA, b) haber terminado el tratamiento oncológico a excepción de la hormonoterapia, c) habilidades básicas de manejo de dispositivos móviles. Se aleatorio a las participantes en dos grupos: grupo control (uso de la aplicación móvil BENECA y recomendaciones habituales de rehabilitación) y grupo de intervención (uso de BENECA y programa presencial de terapia ocupacional). La variable evaluada fue la calidad de vida específica en cáncer de mama mediante el cuestionario EORT QLQ-BR23. La aplicación móvil de salud BENECA se desarrolló y validó en mujeres supervivientes de cáncer de mama para valorar y mejorar la adherencia a estilos de vida saludables en términos de balance energético. El programa presencial de rehabilitación de terapia ocupacional consistió en 12 semanas de intervención, tres días a la semana, con dos horas por sesión, dividido en ejercicios técnico-terapéuticos dirigidos y psicomotricidad. Se realizó un análisis de la varianza para las variables evaluadas mediante el software estadístico SPSS v.25.

Resultados: en este análisis preliminar se encontraron interacciones significativas en la mayoría de las subescalas de la variable estudiada. A saber, imagen corporal (f = 9.621, p <0.001), preocupación por el futuro (f = 6.078, p = 0.003), tratamiento sistémico (f = 3.053, p = 0.049), síntomas de la mama (f = 4.148, p = 0.018), síntomas del brazo (f = 17.284, p <0.001). Tras el programa de intervención, los pacientes del grupo de intervención mejoraron su percepción de la imagen corporal, redujeron su preocupación por el futuro, los síntomas generales, los síntomas de la mama y los síntomas del brazo.

Conclusiones: estos resultados sugieren que un programa de terapia ocupacional en combinación con el uso de una aplicación móvil de fomento del equilibrio energético en supervivientes de cáncer de mama puede ser beneficioso para mejorar su calidad de vida en términos de mejora de los síntomas de la mama y el brazo, así como la percepción de la imagen corporal y su preocupación por el futuro.

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Modalidad: Oral

Proteolytic enzymes have shown efficacy in cancer therapy. We present a combination of the two proenzymes Trypsinogen and Chymotrypsinogen A with potent in vitro and in vivo anti-tumour efficacy. A synergetic anti-tumour effect for Trypsinogen and Chymotrypsinogen A was determined at a ratio 1:6 (named PRP) using 24 human cancer cell lines. The antiangiogenic effect of PRP was analysed by matrigel-based tube formation and by fibrous capsule formation assays. Furthermore, cell invasion and wound healing assays together with qRT-PCR determination of epithelial-to-mesenchymal transition (EMT) markers were performed on human cancer cells treated with PRP. Additionally, in vivo pharmacokinetic studies were implemented and the PRP’s anti-tumour efficacy was explored against orthotopic pancreatic and ovarian cancer tumours. PRP formulation was proven to inhibit in vitro angiogenesis, tumour growth, cancer cell migration and invasiveness; and to be an effective and well tolerated in vivo anti-tumour treatment. Finally, the clinical efficacy of a suppository formulation containing both pancreatic pro-enzymes in the context of a UK Pharmaceuticals Special Scheme was evaluated in advanced cancer patients. Consequently, PRP could have relevant oncological clinical applications for the treatment of advanced or metastatic pancreatic adenocarcinoma and advanced epithelial ovarian cancer.

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Modalidad: Oral

Background: Prostate cancer (PCa) is androgen dependent so the main therapy is based on serum androgens reduction (ADT) and inhibition of the androgen receptor (AR) through different drugs (abiraterone or enzalutamide). However, 10-20% of tumors become castration resistant increasing the risk of metastasis. Mechanisms for treatment resistance include AR amplification, gain-of-function mutations and alternative splicing producing variants (AR-V7 or AR-V9) lacking the ligand-binding domain. Presence of AR-V7 in circulating tumor cells (CTCs) is a well-accepted predictive biomarker for treatment response. However, low amounts of CTCs and different primer efficiencies, difficult its reproducibility. Platelets, a much more abundant cell type than CTCs, contain androgens and also synthesise testosterone at functionally relevant levels, constituting a paracrine mechanism of resistance. Recently, their role in carcinogenesis as metastatic vehicles was suggested as they can be ^educated"by the tumor, affecting gene expression and thus alterring RNA profiles in platelets. Material and methods: PCa cell lines were used for primer validation and treatment resistant experiments. Peripheral blood samples from PCa patients recruited in 7 hospitals were processed for platelets and CTCs isolation. RNA extracted from platelets was retrotranscribed for AR variants expression analyses and CTCs were detected using immunofluorescence. Results: Primers for each splicing variant were designed and validated in PCa cell lines. Treatment resistance with ADT, enzalutamide or abiraterone was achieved in sensitive and semi-resistant PCa cell lines and was associated with an increase expression of wild type AR, AR-V7 and AR-V9 in semi-resistant and only of wild type AR in sensitive cells. Furthermore, 50 radical prostactectomy (RP) and 50 castrate resistant prostate cancer (CRPC) patient samples were analysed before and after treatment (3, 6 and 12 months) for AR status and CTC counts together with 13 age-matched healthy controls. AR-V7/V9 expression was found at baseline in 12% and 34% CRPC and in 12% and 14% PR patients respectively with most of them showing decreasing expression after treatment. Contrarily, some patients, negative for AR-V7/V9 at base line, had increased expression after treatment (10% and 0.4% CPRC and 16% and 6% RP patients for AR-V7/V9 respectively). Conclusions: Generation of cell line models mimicking CRPC patients allowed analysis of resistant pathways based on AR-V7/V9 expression. We also demonstrated presence of AR-V7/V9 in platelets suggesting their potential use as predictive markers for PCa. Finally, design of specific primers discriminating between both variants allowed understanding the contribution to treatment resistance of each variant independently.

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Modalidad: Póster

Background and aims: Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) is the most common epithelial tumor of the pancreas. It is an aggressive and difficult malignancy to treat. In fact, complete surgical removal of the tumor is the only chance for cure, but PDAC is surgically incurable at the time of presentation in 80-90% of patients. For that reason, metabolomics, the omic technology focused on the presence of metabolites, could be a powerful tool to searching for potential diagnostic biomarkers of this malignancy, since metabolites serve as direct signatures of biochemical activity and are therefore easier to correlate with phenotype. In this context, the goal of our study was to identify a differential metabolomic signature for PDAC patients.

Methods: We analyzed plasma samples from 119 individuals: 60 healthy controls and 59 PDAC patients using reverse phase liquid chromatography coupled to high-resolution mass spectrometry in electrospray ionization mode. Univariate and multivariate statistical analysis were used to evaluate differences between the groups. The receiver operator characteristic (ROC) curves analysis was applied to evaluate the diagnostic ability of all candidates.

Results and Discussion: Multivariate statistical analysis revealed a clear separation between both groups. Accordingly, eleven candidates were tentatively identified as potential biomarkers of PDAC, including glycerophospholipids, bile acids, fatty acids, steroids, triglycerides, retinoids and amino acids. Multivariate ROC analysis showed that they provided diagnostic capacities with an AUC value of 0.975 (95% CI: 0.933-1). The corresponding confusion matrix revealed that 57 HC samples were correctly classified, whereas 3 HC samples were incorrectly assigned. In the PDAC group, 50 samples were correctly classified, whereas 7 samples were incorrectly.

Conclusion: Our results suggest that liquid chromatography-high resolution mass spectrometry-based metabolomics provides a potent diagnostic tool for PDAC.

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Modalidad: Póster

The size and composition of deoxyribonucleotide (dNTP) pools may affect the fidelity of DNA synthesis and consequently the genetic integrity of nuclear and mitochondrial genomes. In order to maintain dNTP pool homeostasis, the synthesis and degradation of DNA precursors must be precisely regulated. One of such mechanisms involves the catabolic conversion of deoxynucleoside triphosphates into their monophosphate form. Nucleotide hydrolysis also contributes to prevent the incorporation of non-canonical or damaged nucleotides into DNA. Human all-alpha dCTP pyrophosphatase 1 (DCTPP1) is a dCTP hydrolase with high affinity for dCTP and certain 5’-modified dCTP derivatives. Here, we have investigated the impact of DCTPP1 in pyrimidine metabolism and genomic integrity by characterizing enzyme-defective haploid cells derived from the HAP-1 cell line. DCTPP1-knockout cells exhibit normal growth and cell cycle progression with no changes in the expression levels of other pyrimidine nucleotide metabolic enzymes. In contrast, the nucleotide pool and the dUTP/dTTP ratio are severely altered in DCTPP1 defective cells, which undergo an accumulation of uracil in their genomic DNA, the activation of the DNA damage response and exhibit a hypermutator phenotype. Moreover, DCTPP1-deficient cells are highly sensitive to thymidine kinase 1 down-regulation, indicating that thymidine salvage is specially needed in the absence of DCTPP1. Overall, these data suggest a relevant role for DCTPP1 and the dCMP generated in the provision of thymidylate likely via dCMP deaminase and thymidylate synthase.

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Modalidad: Póster

Antecedentes: Los tratamientos más habituales frente al carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello (HNSCC) son la radio y la quimioterapia. Estos tratamientos presentan importantes inconvenientes. Las limitaciones de estas terapias y el escaso avance en el desarrollo de nuevos tratamientos frente al HNSCC explican el mal pronóstico y la baja tasa de supervivencia de los pacientes. Por tanto, es imprescindible el desarrollo de nuevas estrategias que potencien los efectos de los tratamientos ya existentes y reduzcan sus efectos secundarios, o que ofrezcan nuevas alternativas terapéuticas. Diferentes estudios han demostrado que la melatonina (aMT) previene algunos de los efectos secundarios y mejora la eficacia de ciertos tratamientos.

El objetivo de este estudio es evaluar la capacidad de diferentes formulaciones de melatonina para potenciar la citotoxicidad de la quimio y la radioterapia en el HNSCC, así como para reducir los efectos adversos de estos tratamientos.

Materiales y métodos: Este estudio se ha llevado a cabo en ratones nude a los que se le realizaron xenoinjertos de células Cal-27. Estos ratones han sido irradiados (IR) a 4 Gy, tratados con cisplatino (CDDP) a 4 mg/kg por vía intraperitoneal, solo o en combinación con un tratamiento de aMT vía subcutánea. Otros grupos de ratones se trataron solo con aMT por vía subcutánea o intratumoral. Una vez terminado el tratamiento, los animales se sacrificaron y se les extrajo el tumor y órganos sanos. Se realizó un análisis histológico (tinción H/E, con picrosirius y con ácido periódico de Schiff) y se midió la concentración de melatonina de los tumores. En el resto de los tejidos se analizaron los niveles de nitritos y lipoperoxidación.

Resultados: El tratamiento combinado de IR más aMT produce una reducción del volumen de los tumores respecto a los controles, una disminución del quiste tumoral central, un aumento del grado de diferenciación y un incremento de la cápsula peritumoral. En cambio, en el tratamiento combinado de CDDP más aMT no se observan estos efectos debido a que el nivel de melatonina que se alcanza en el interior del tumor no es suficiente. Además, ambos tratamientos no producen un aumento de los niveles de estrés oxidativo en los órganos sanos. Finalmente, se demuestra la mayor efectividad de la administración intratumoral de melatonina respecto a la administración subcutánea.

Conclusión: La melatonina, a altas dosis, potencia los efectos citotóxicos de la radioterapia y del CDDP, a la vez que protege los tejidos sanos del daño producido por estos tratamientos in vivo.

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Modalidad: Oral

FlowChemNAT technology is being developed as a novel approach for the detection of single nucleotide differences. It relies on the combination of the already validated chemical-based method for nucleic acids analysis (ChemNAT technology) with flow cytometry as readout tool. It is based on 4 key tools:

1) An abasic PNA probe whose abasic position will target the nucleotide under interrogation.

2) A biotinylated SMART-Nucleobase which will be dynamically incorporated into the “blank site” of the abasic PNA probe following Watson-Crick base-pairing rules.

3) Fluorescently-labelled nanoparticles and functionalized with Streptavidin to bind to the biotin tag of the SMART-Nucleobase.

4) A fluorescently-labelled PNA probe which will act as guide probe providing the co-localization signal needed to consider the results as true positive.

The nucleotide under interrogation will be unequivocally identified by a double-fluorophore positive population: one due to the signal of the fluorophore of the nanoparticle and the second one because of the fluorophore of the guide PNA probe.

For this proof-of-concept study, KRAS gene has been used as target nucleic acid Because of the relevant role of KRAS mutations in human tumorigenesis. RAS gene family can be mutated in up to 30% of human cancers. These RAS-activated malignancies are usually tissue specific. For example, mutations in KRAS are commonly found in lung, colorectal, ovarian, and pancreas cancers8. Moreover, KRAS mutations are usually single nucleotide changes found mainly in codon 12, 13 or 61. When KRAS is mutated, its GTPase activity is impaired leading to a constitutively active GTP-bound state and the activation of downstream proliferative signaling pathways7 with the formation of new blood vessels and an aggressive cancer growth.

The use of FlowChemNAT technology to detect single nucleotide changes represents an alternative to the actual nucleic acid-based diagnosis methods which would provide benefits in terms of result consistency, cost and easy-of-use.

I Congreso de Investigadores del PTS. Granada 13-15 Feb. 2019

Modalidad: Póster

The protein kinase R (PKR) is an interferon-inducible double-stranded RNA protein kinase with multiple effects on cells that contributes to the cellular response to numerous types of stress. PKR has been extensively studied for its relevance as an antiviral agent and a cell growth regulator. Recently, the role of PKR related with metabolism, inflammatory processes, cancer and neurodegenerative diseases has gained interest. The identification of PKR as a target of both conventional chemotherapeutic and novel drugs highlights the need to carry out translational studies with patients to validate its potential as a biomarker of important diseases like cancer. The objective of this study was to determine the expression levels of PKR, furthermore, the expression of the non-coding element regulating PKR called pre-mir-nc886 in tumor tissue, respect to healthy tissue, and its relation with the clinical evolution of the patient. For this purpose, immunohistochemistry and real time PCR expression were performed. Plasma of patients has been also analysed. To date, 117 metastatic colon cancer patients with unresectable liver metastatic, treated in the first line with chemotherapy based on the use of 5-Fluorouracil (5-FU) drug have been evaluated. Results have shown that both expression of PKR and its pre-microRNA-nc886 vary between the tumor and the healthy tissues and plasma in each patient. Therefore, three different profiles of patients have been performed by clustering analyses. The data have been statistically related to the Objective Rate of Response of the patients to the chemotherapeutic treatment and have allowed to indicate that both the expression of PKR and nc886 tend to be statistically related to the evolution of the patients. Hence, "nºf patients must to be increased, due to our results suggest that PKR and nc886 may be potential predictive biomarkers to response to treatments based on the use of 5-FU in metastatic colon patients.

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Modalidad: Póster

Background and aims

Sodium selenite is an inorganic oxo-salt used as a source of selenium for the synthesis of selenoproteins. However, at higher doses, selenite selectively becomes a toxic agent for tumor cells. This is due to the fact that selenite is an extremely reactive anion that causes the depletion of reduced glutathione and thioredoxin leaving the cell defenseless against cellular oxidative stress. On the other hand, pancreatic cancer is the ninth most frequent and the fourth most lethal. Despite of treatments (surgery, radiotherapy and chemotherapy), it has a survival rate of 20% per year and 7% at five years. The aim of this study was to demonstrate the antitumor capacity of sodium selenite in pancreatic cancer cell lines, both human and murine, as well as the chemosensitization of selenite with gemcitabine, the main antitumor agent used to treat pancreatic cancer.

Methods

Sodium selenite was tested in cell cultures in vitro of the human pancreatic adenocarcinoma line PANC-1 and the murine line Pan02, conducting cell viability studies with sulforrodamine B. Also, the combination of sodium selenite was performed with gemcitabine in these cell lines. Cell cycle studies were carried out by flow cytometry using propidium iodide and cytotoxicity studies on spheroids of the Pan02 line.

Results

The results show a potent antitumor activity in monotherapy on the lines of pancreatic adenocarcinoma in vitro. Furthermore, the use of sodium selenite at non-cytotoxic doses in combination with gemcitabine substantially increases the cytotoxic action of the latter on the tumor cells. This antitumor activity was also confirmed on pancreatic adenocarcinoma spheroids generated in vitro.

Conclusion

In conclusion, sodium selenite shows a potent antitumor activity in vitro both alone and in combination with gemcitabine in pancreatic adenocarcinoma. These results are promising in terms of their translation to animal studies and clinical trials.

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Modalidad: Póster

The irradiation of the Mesenchymal stem cells (MSCs) at sublethal doses modifies the expression of proteins that may have antiproliferative action and ability to improve, through the bystander effect, the result of conventional treatments. Objective: The objective proposed in this work was to study the biodistribution of irradiated normal umbilical cord mesenchymal stem cells (UC-MSCs-IR) and transformed mesenchymal stem cells (T-MSCs) in mice organs and their possible tumorigenic capability. Material and methods: 1x10⁵ UC-MSCs-IR/50 uL or T-MSCs cells were intravenously inoculated in NOD/SCID gamma mice (n=64). The following groups were established: Control (n = 8), treated with UC-MSCs (n = 8), treated with UC-MSC plus radiotherapy (n = 8) and treated with T-MSCs (n = 8). The presence of UC-MSCs were detected in murine tissues with morphological (H-E stain), immunohistochemical (anti-vimentin antibody) techniques and detected Alu human sequences by quantitative Polimerase Chain Reaction. Results: The UC-MSCs-IR are >75% of viability at 20 hours. Mice injected with UC-MSCs and UC-MSCs-IR showed similar weight and survival rate to control mice. The irradiated UC-MSCs can be immunolocalized by immunohistochemical techniques using antibodies against the vimentin intermediate filament. The UC-MSCs-IR were found in the lungs and liver on day 6, while on day 14 the UC-MSCs-IR were not found in any organ by immunohistochemical techniques, unlike T-MSCs developed tumors in the lung and liver. However, by qPCR Alu sequences of UC-MSCs-IR were still detected in all organs on day 14, but were never found in the long-term study (90 days). Conclusions: The UC-MSCs-IR do not induce morphological changes in mice organs and persist long term. The effect of UC-MSCs-IR can be safe for use in a clinical trial for the treatment of rectal cancer it can being a good strategy to improve the outcome of patients treated with radiotherapy.

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Modalidad: Póster

Recently, immunotherapy has gained importance in oncology, with a special focus on novel treatment aimed at augmenting the ability of the immune system to destroy tumor cells. Nevertheless, immune escape mechanisms developed by tumor cells, such as loss of the Human Leukocyte Antigen I (HLA-I) expression due to genetic or transcriptional defects, may play an essential role in the resistance to immunotherapy. Hence, HLA testing before and during immunotherapy may provide key insights into how to effectively personalize cancer treatment. A non-invasive way to perform this analysis is to isolate tumor-derived exosomes (TDEs) from peripheral blood and perform molecular HLA-I profiling. TDEs are microvesicles released by tumor cells that circulate in body fluids and reflect the content of their parenteral cells. With the aim of investigating whether HLA-I alterations can be detected in TDEs, we purified and studied exosomes from human tumor cells (melanoma, colon and lung cancer cell lines) and from peripheral blood of patients with lung cancer with previously characterized HLA-I alterations (total loss of HLA expression caused by mutations in beta-2 microglobulin (b2m) or partial loss of HLA-I haplotype). We used flow cytometry, HLA genotyping and b2m sequencing to measure the HLA-I expression on the surface of these vesicles and evaluate genetic HLA-I alterations. In TDEs we were able to identify HLA-I expression patterns and mutations previously detected in their parental cancer cells. Moreover, we were also able to use this approach to monitor the changes in exosome HLA-I expression during melanoma progression using TDEs isolated from three tumor cell lines established from three different metastases: stage III lymph node metastasis, Ma-Mel-86a, and two consecutive stage IV lymph node lesions, Ma-Mel-86b and Ma-Mel-86c. Flow cytometry of the exosomes demonstrated HLA-I expression patterns similar to their parenteral cells: TDEs from Ma-Mel-86a and Ma-Mel-86c expressed HLA-I and b2m, whereas exosomes from Ma-Mel-86b were HLA-I negative and did not express b2m. Therefore, these findings suggest that TDEs could be potentially used to characterise HLA-I phenotypes of tumor cells and to monitor the progression of the disease by a non-invasive method. We also isolated exosomes from serum of lung cancer patients and analysed their HLA-I expression by flow cytometry obtaining variable results in different patients. Although the analysis of HLA-I in liquid biopsy needs to be further optimized, the preliminary data strongly support the promising potential of non-invasive analysis of tumor HLA-I alterations using this approach. It can be valuable in monitoring the HLA-I expression in cancer patients undergoing immunotherapy as a tool of a personalised treatment of cancer.

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Modalidad: Póster

Introducción: El cáncer colorrectal (CRC) es el tercero más prevalente del mundo y causa elevada mortalidad. Numerosos esfuerzos en investigación dieron lugar al descubrimiento de material procedente del tumor en diversos fluidos biológicos, constituyendo una herramienta no invasiva para obtener información tumoral, la biopsia líquida. Entre ese material se encuentran células tumorales circulantes (CTCs) y ácidos nucleicos como los microRNAs (miRNAs). Las CTCs son células procedentes del tejido tumoral presentes en el torrente sanguíneo que dan lugar a diferentes metástasis y con unas características propias que permiten su aislamiento. Los miRNAs son una familia de RNAs pequeños no codificantes, de tamaño variable (21-25 nucleótidos), cuya función es regular la expresión de genes implicados en rutas biológicas (entre ellas, la carcinogénesis). La estabilidad de los microRNAs libres en suero está bajo debate, razón por la cual, en este estudio se analizó su expresión dentro de exosomas, definidos como contenedores de información genética y se analizaron los niveles de microRNAs exosomales y de CTCs como potenciales marcadores pronóstico en CRC metastásico. Material y métodos: se determinó la expresión diferencial de 11 miRNAs exosomales en términos de recaída y supervivencia en una cohorte de 46 individuos con CRC metastásico (CRCm). Por otro lado, se correlacionó la presencia de CTCs con variables clínicopatológicas y con los niveles de miRNAs. Resultados: se encontró asociación entre miRNAs y características clinicopatológicas como los niveles de CEA, las metástasis, la supervivencia libre de progresión, o la supervivencia global, pero no así con la respuesta al tratamiento ya que solo una pequeña parte de la población mostró respuesta favorable al mismo. Se relacionaron niveles elevados de miRNA-92a con la localización del tumor primario en colon además de con peor pronóstico. Los niveles de miRNA-92a, miRNA-155 y miRNA-126 se encontraron elevados y los niveles de miRNA-19b reducidos en pacientes con mutación en KRAS en comparación con el gen nativo. Los niveles basales de miRNA-21, miRNA-200b y miRNA-126 se correlacionaron positivamente con los niveles de CEA. Finalmente, niveles elevados de miRNA-19b y miRNA-222 fueron indicativos de tropismo hacia el pulmón. Respecto a las CTCs, a pesar de tener menor asociación con las variables clínicas, se encontró asociación con los niveles de CEA. Conclusiones: el uso de la biopsia líquida a través del análisis de los niveles de expresión de miRNAs exosomales y CTCs en pacientes con cáncer colorectal metastásico es una herramienta pronóstica complementaria a las variables clinicopatológicas, ofreciendo una información adicional sobre la preferencia biológica del tumor a metastatizar (organotropismo). Estos descubrimientos podrán ser utilizados en el futuro para el desarrollo de herramientas clínicas y mejora de la atención sanitaria a los pacientes.

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Modalidad: Póster

Introducción: Los pacientes de cáncer de cabeza y cuello sufren una serie de secuelas como consecuencia al tratamiento médico realizado. Dichas secuelas pueden afectar al hombro, generando un aumento de la percepción de dolor y una disminución de su funcionalidad

Objetivo: Analizar la presencia de dolor y el aumento de la discapacidad del hombro así como la pérdida del rango de movimiento en pacientes de cáncer de cabeza y cuello con respecto a personas sanas

Métodos: Se realizó un estudio transversal descriptivo en el que se comparó una muestra de 20 pacientes de cáncer de cabeza y cuello (edad 58.50±12.80) provenientes del servicio de Oncología del Hospital Universitario Virgen de las Nieves y 20 personas sanas (edad 58.10±12,73) pareadas por género y edad con los pacientes. La percepción de dolor y disfunción de hombro se realizó con el cuestionario Shoulder Pain And Disability Index (SPADI). La movilidad de hombro en los rangos de flexión, abducción y rotaciones externa e interna se realizó mediante goniometría manual.

Resultados: El ANOVA reveló que los pacientes de cáncer de cabeza y cuello muestran diferencias estadísticamente significativas en el dolor percibido en el hombro afecto frente a las personas sanas en los siguientes ítems de la subescala dolor del cuestionario SPADI: en el peor momento (p=0.002), al alcanzar un objeto en un estante alto (p=0.002), al tocarse la parte posterior del cuello (p=0.024) y al empujar un objeto con el brazo afecto (p=0.013) No se obtuvieron resultados estadísticamente significativos para el ítem de dolor al acostarse sobre el lado afecto (p=0.056). En el apartado de dificultad, el ANOVA reveló diferencias estadísticamente significativas en todos sus ítems: lavarse el pelo (p=0.001), lavarse la espalda (p=0.002), ponerse una camiseta o jersey (p=0.001), ponerse una camisa (p=0.025), ponerse los pantalones (p=0.014), coger un objeto de un estante alto (p=0.002), llevar un objeto pesado (p=0.001), coger algo del bolsillo trasero (p=0.006). Se evidenciaron resultados estadísticamente significativos entre grupos pero no entre lados para la movilidad en los rangos de flexión (entre grupos p=0.004; entre lados p=0.193), abducción (entre grupos p<0.005; entre lados p=0.236) y rotación externa (entre grupos p=0.007; entre lados p=0.964). No se obtuvieron resultados significativos para la rotación interna (entre grupos p=0.074; entre lados p=0.560). El análisis de correlación evidenció que existe una correlación negativa entre los valores totales de dolor y discapacidad en el cuestionario SPADI y los rangos de movimiento del hombro (p<0.015), exceptuando la rotación interna.

Conclusion: Los pacientes de cáncer de cabeza y cuello presentan un aumento del dolor y de la disfunción del hombro junto con la disminución de su rango de movimiento. Estas secuelas se relacionan entre sí, presentando menor movilidad cuanto mayor es el grado de dolor y disfunción percibido.

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Modalidad: Oral

Obesity increases the adverse prognosis of all breast cancer subtypes at any age, and is also associated with an increased risk of developing estrogen receptor-positive (ER+) breast cancers after menopause. However, mechanisms thereof are not fully known. It is well established that obesity mediates a chronic inflammatory state through NF-κB pathway driven pro-inflammatory cytokine expression. We have previously shown that prolonged exposure to several pro-inflammatory cytokines, including CCL2, IL6 and IL8; increased the proportion of both ER+ and ER- breast cancer cells that form mammospheres and express ALDH activity in vitro and that can initiate primary tumors and metastasis in vivo. Our ongoing work investigates the role of estrogens and the NF-κB pathway in obesity-mediated inflammation and breast tumor progression. We have observed that breast cancer cells exposed to isolated mammary breast adipocytes upregulate the expression of pro-inflammatory cytokines and embryonic stem-transcription factors (ES-TF); and increase the proportion of cells with the ability to form mammospheres and that express ALDH activity in vitro. Interestingly, we found that ER+ breast cancer cells were more sensitive than ER-; and that the effect mediated by adipocyte co-culture was partially abolished by the addition of letrozole, an inhibitor of aromatase which is highly expressed by fat cells. We also found that adipocyte co-culture increased NF-κB activity in ER+ breast cancer cells; and the addition of NF-κB inhibitors prevent co-culture mediated cytokine induction. In vivo experiments using B10.Cg-H2k Tg(NFκB/Fos-luc)26Rinc/J female mice, a mouse model that expresses the luciferase gene driven by two copies of the NF-κB regulatory element, demonstrated that obesity activates the NF-κB pathway particularly in the mammary gland. Following invasion into local obese fat, high aromatase levels would increase local estrogen to promote obesity-mediated NF-κB activation and cytokine induction; and drive ER+ breast cancer progression and metastasis.

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Modalidad: Póster

Objetivos: valorar el perfil clínico en cuanto a alteraciones sensitivas, calidad de sueño y capacidad funcional en supervivientes de cáncer de mama (CM) y colon (CC) que presentan neuropatía periférica asociada a la quimioterapia.

Métodos: estudio descriptivo, transversal, realizado en noviembre de 2018. Un total de 11 pacientes (n=2 CM y 9 n=CC) con presencia de neuropatía periférica asociada al tratamiento por quimioterapia fueron derivados del Hospital Virgen de las Nieves de Granada y valorados en la Unidad de Apoyo al Paciente Oncológico “CUIDATE” de Granada. La intensidad de los síntomas de la neuropatía se estudió mediante el cuestionario European Organisation for Research and Treatment of Cancer Chemotherapy-Induced Peripheral Neuropathy Quality of Life Questionnaire (EORTC QLQ-CIPN20) (0-100 donde mayor puntuación evidencia más síntomas sensoriales); la calidad del sueño se registró con el Índice de Calidad de Sueño de Pittsburgh (0-21 donde mayor puntuación se relaciona con peor calidad de sueño) y la movilidad del paciente que se midió con el test Timed Up and Go (TUG).

Resultados: En la muestra la edad media de los pacientes fue de 58.27±8.30; un 54.54% eran hombres y un 45,45% mujeres; todos recibieron quimioterapia como tratamiento, pero un 27% de los pacientes recibieron además radioterapia asociada; un 90.91% de los pacientes presentaban síntomas en las 4 extremidades. En cuanto a intensidad de los síntomas los valores fueron de una media de 48.15±25.45 en la subescala sensorial, en calidad del sueño de 7.45±4.59 y el test TUG se desarrolló en 8.44±2.14 segundos.

Conclusiones: A pesar del diseño propuesto en este estudio, los resultados apuntan a la sintomatología problemática que presentan los pacientes con cáncer que sufren neuropatías periféricas por quimioterapia. Se muestra que presentan síntomas sensoriales compatibles con nivel patológico, así como peor calidad de sueño. Estos pacientes necesitarían un abordaje integral desde el punto de vista de la fisioterapia para trabajar todos los problemas presentados anteriormente.

Palabras clave: cáncer colorrectal, cáncer de mama, neuropatía, calidad de vida, calidad del sueño.

Chen, D., Yin, Z., & Fang, B. (2018). Measurements and status of sleep quality in patients with cancers. Supportive Care in Cancer, 26(2), 405-414.

Postma, T. J., Aaronson, N. K., Heimans, J. J., Muller, M. J., Hildebrand, J. G., Delattre, J. Y., ... & Moynihan, C. (2005). The development of an EORTC quality of life questionnaire to assess chemotherapy-induced peripheral neuropathy: the QLQ-CIPN20. European journal of cancer, 41(8), 1135-1139.

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Modalidad: Póster

Background and aims

Pancreatic ductal adenocarcinoma represents the fourth cause of death worldwide caused by cancer and owns a 5% survival rate. The poly ADP-ribose polymerases are a family of enzymes involved in the repair of DNA damage that have been related to the development of cancer and drug resistance due to its possible overexpression in cancer stem cells (CSC’s). The objective of this work is to discover if the inhibition of its main member (PARP1) is able to increase the efficacy of traditional drugs used against PDAC.

Methods

The PDAC Panc02 cell line was cultured in DMEM culture medium (Sigma) supplemented with fetal bovine serum (10%) and penicillin / streptomycin (5%), detached by the use of trypsin-EDTA and washed with phosphate buffered saline (PBS). A pancreatic fragment from a C57B1 / 6 immunocompetent mouse was excised and maintained at -80 degrees for further processing. To carry out the quantitative PCR, the RNA was extracted from the mouse pancreas and the cell line using the Aurum ^TM Total RNA Mini Kit (Bio-Rad), RNA retro-transcription was performed using the iScript ^TM cDNA kit Synthesis Kit (Bio-Rad) and a real-time amplification was carried out using SsoFast ^TM EvaGreen Kit (Bio-Rad). For cytotoxicity assays, the Panc02 line was cultured for 24/72 hours in 96-well plates (Sigma) together with Doxorubicin (Selleckhem) and / or Olaparib (Selleckhem), a PARP1 specific inhibitor. The cytotoxicity results were obtained using Sulforhodamine B protocol. For the processing and representation of results, the Graphpad Prism 7 software was used, obtaining the values of significance by t-test.

Results

The expression of PARP1 in the tumor line of PDAC is significantly higher (15 times) than in non-tumorous murine pancreatic tissue. On the other hand, the cytotoxicity tests using the double treatment (a single concentration of Olaparib with a range of previously tested concentrations of Doxorubicin) indicated that the IC50 of Doxorubicin decreased 4 times (0.23 vs 0.06 μg/ml) when used together with Olaparib 10 μM facing the single use of the cytotoxic drug at 24 hours and more than 30 times (0.34 vs 0.01 μg/ml) at 72 hours. Therefore, the results demonstrate the presence of a significant decrease of the IC50 of Doxorubicin in this cell line when the combined treatment of this drug was used together with the specific inhibitor of the enzyme PARP1, whose expression is increased in the pancreatic tumor cell line.

Conclusion

Since its expression in pancreatic tumor cell lines is higher than in non-tumor pancreatic tissue and its inhibition by using specific inhibitors can increase the efficacy of drug treatments frequently used in cancer, PARP1 expression is essential for drug resistance in PDAC tumor cells.

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Modalidad: Póster

New treatment modalities are urgently needed to better manage advanced breast cancer. Combination therapies are usually more effective than monotherapy. In this context, a series of cyclic and acyclic O,N-acetals derivatives compounds and the suicide gef gene shown a potent anti-tumour activity and represent a new generation of anticancer agents. Here, we evaluate whether the gef gene is able to enhance the anti-tumour effect of cyclic and acyclic O,N-acetals purine derivatives and elucidate their mechanisms of action. Among all compounds tested, those with a nitro group and a cyclic pattern structures (FC-30b2, FC-29c and bozepinib) are the most benefited from the gef gene effect. These compounds, in combination with gef gene, were able to abolish tumour cell proliferation with a minimal dose leading to more effective and less toxic chemotherapy. This combined therapy is mediated by the induction of apoptosis which may be deregulated in advanced breast cancer. Moreover, the combined therapy leads to an increase of cell post-apoptotic secondary necrosis that may promote the immunogenicity of cancer cells succumbing to treatment. This data suggests that this novel combination therapy represents a promising candidate for breast cancer treatment.

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Modalidad: Póster

Introducción: El cáncer de tiroides es el tipo de cáncer más común del sistema endocrino, siendo la tiroidectomía el tratamiento preferente. Las complicaciones asociadas a este tipo de cirugía son comunes y, entre ellas, el dolor posterior de cuello está presente en el 80% de los pacientes. Por lo tanto, el objetivo de estudio fue analizar las alteraciones musculoesqueléticas a largo plazo presentadas en este tipo de pacientes.

Métodos: Se llevó a cabo un estudio observacional de casos y controles. Veintiocho pacientes que habían sido intervenidos por tiroidectomía hace 6 meses y 28 controles sanos fueron incluidos. Las variables recogidas fueron las alteraciones musculoesqueléticas de cuello, mediante el rango de movimiento cervical y la exploración de puntos gatillo; y variables funcionales, incluyendo la intensidad del dolor y la discapacidad.

Resultados: Se encontraron diferencias significativas entre ambos grupos en la flexión (p=0.002) y extensión de cuello (p=0.005), con valores más bajos en el grupo sometido a tiroidectomía. El número de puntos gatillo fue mayor también en este grupo en los siguientes músculos: ambos escalenos (p<0.001), ambos esternocleidomastoideos (p<0.001), ambos trapecios superiores (p=0.005 y p=0.008), angular de la escápula derecho (p=0.002) y ambos suboccipitales (p=0.002). la intensidad del dolor (p<0.001). Por otro lado, la escala “Neck Outcome” (p<0.05) también presentó diferencias significativas, con peores valores en el grupo intervenido con tiroidectomía.

Conclusión: Los pacientes sometidos a tiroidectomía, seis meses tras la intervención, presentan una disminución significativa del rango de movimiento del cuello y un aumento del número de puntos gatillo. Además, estos sujetos presentan mayor intensidad del dolor y más discapacidad seis meses después de la cirugía.

Palabras clave: cáncer tiroides, tiroidectomía, funcionalidad, cuello.

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Modalidad: Póster

Background: One of the main treatments against head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) is radiotherapy. However, this treatment has a lot of side effects, being one of the most important oral mucositis. In this way, we have developed a melatonin’s gel that protects normal cells from this disease induced by radiotherapy. Therefore, we questioned about how melatonin affects tumoral cells. As reported, radiotherapy acts at different intracellular levels such as nucleus, membranes or mitochondria. The main target for melatonin is the mitochondrion and oncostatic effects of this hormone have been previously described. For this reason, we evaluated whether melatonin can synergize with radiotherapy to enhance the cytotoxic effects of this treatment.

Materials and Methods: The dose-dependent effects of melatonin were analyzed in irradiated head and neck human cancer cells, Cal-27 and SCC-9 in culture. Cells were maintained in DMEN medium, supplemented with 10% fetal bovine serum at 37 ^oC in a humidified atmosphere of 5% CO2 and 95% air. Cells were treated with melatonin (100, 500 and 1500 μM) alone or in combination with irradiation 8 Gy (IR). The clonogenicity capacity of the cells, proliferation (MTT), apoptosis (flow cytometry), mitochondrial respiration, ROS production (DCFH-DA), nitrites, GSH/GSSG levels, and antioxidant enzymes were evaluated in these conditions. The results were analyzed with GraphPad Prism 6 software.

Results: Melatonin produces an increase of the mitochondrial mass in HNSC cells treated with IR, being more significant in Cal-27 rather than SCC-9 cell line. At the same time, melatonin induces an increment of ROS level without increases the antioxidant enzyme activity. Moreover, the combination of melatonin and IR treatment produces an increase of apoptosis level as well as a decrease of the proliferation and clonogenicity capacity. Therefore, the increase of oxidative stress levels, produced by melatonin treatment, entails the increase of the cytotoxic effects of IR in vitro.

Conclusion: High melatonin concentrations potentiate the citotoxicity of radiotherapy in head and neck human cancer cells.

Supported in part by grant n^o SAF2013-49019-P

Fernández-Gil B, et al. Plos One 2017; 12: e0174474.61-173

Abdel Moneim AE, et al. Int J Mol Sci 2017; 18(5). doi: 10.3390/ijms18051003

Shen YQ, et al. J Pineal Res 2018; 64(3). doi: 10.1111/jpi.12461

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Modalidad: Póster

BNCT (terapia mediante captura de neutrones por boro) es una forma experimental de radioterapia basada en la irradiación con neutrones térmicos (de baja energía) de tumores previamente enriquecidos con 10B. La reacción que se produce cuando el 10B captura este neutrón térmico da lugar a la emisión de una partícula α además de iones de litio. Estas partículas tienen un bajo rango de alcance (<10um) y unos valores de deposición de alta energía (>2MeV) por lo que las células donde se ha absorbido el 10B serán destruidas sin ocasionar daños colaterales en el tejido circundante sano. Su eficacia biológica es mucho mayor que la de radiación utilizada en la radioterapia convencional contra el cáncer.

Con BNCT es posible tratar tumores resistentes a la radioterapia convencional y tumores entremezclados con tejido sano. Si se consigue que un número suficiente de átomos de boro penetren en la célula tumoral, la irradiación con neutrones térmicos causará daños irreversibles en el ADN. Esta terapia se ha aplicado recientemente en ensayos clínicos en varios países, especialmente en Japón, Finlandia, Argentina e Italia, para casos de pronóstico muy desfavorable como glioblastoma multiforme o cánceres recurrentes de cabeza y cuello. Los dos compuestos de boro aprobados hasta el momento para su uso en clínica han sido la boro-fenilalanina (BPA), con un solo átomo de boro y cierta selectividad por las células tumorales, y el BSH (B12Na2H11SH), más enriquecido en boro pero menos selectivo. Los resultados clínicos obtenidos están siendo muy prometedores, ya que muestran una tasa de supervivencia mucho mayor que las terapias convencionales.

Los objetivos de nuestro trabajo son obtener datos nucleares y radiobiológicos que permitan mejorar la dosimetría en BNCT y estudiar in vitro nuevos compuestos de alto contenido en boro para BNCT. Para ello, se están llevando a cabo irradiaciones in vitro de distintos tipos de líneas tumorales y de células sanas con neutrones de baja energía. Estos experimentos se están realizando en el Institut Laue-Langevin (ILL, Grenoble), utilizando el laboratorio PF1b donde no hay contaminación de neutrones rápidos y apenas hay emisiones gamma, de tal manera que los resultados obtenidos se deben principalmente al efecto de los neutrones y no de otro tipo de partícula. El estudio de la supervivencia celular se lleva a cabo mediante ensayos de clonogenicidad y de proliferación celular. Además, estamos analizando la citotoxicidad y la captación de nuevos compuestos de boro, nanoencapsulados o no, en líneas de células tumorales y sanas.

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Modalidad: Póster

Se trata de un estudio observacional de tipo descriptivo realizado en un hospital universitario de tercer nivel donde se incluyeron pacientes que ingresaron durante los meses de septiembre, octubre y diciembre de los años 2006, 2015 y 2017 en una planta de Medicina Interna. Se revisó la frecuencia de prescripción de fentanilo respecto al total de ingresos durante esos meses y se compararon en los tres años, así como las características de los pacientes con dicha prescripción. Estos datos fueron analizados a fin de comprobar cambios en la frecuencia y perfil de los pacientes que tenían prescrito dicho fármaco. El uso de fentanilo en España clásicamente ha sido inferior en comparación con otros países europeos y EEUU, pero entre los años 2008 y 2015 ha experimentado un aumento del 84% por diferentes motivos entre los que destacan los efectos secundarios de los AINEs, el aumento de uso en pacientes no oncológicos y los tratamientos crónicos. En el año 2000, España ocupaba la posición 15^o en el ranking mundial del consumo de fentanilo, ascendiendo en 2015 a la posición 5^o de Europa y 6^o en el mundo (incluso por encima de la media Europea y de EEUU, donde el abuso de fentanilo es considerado una epidemia y por tanto un problema de salud pública). El abuso de opioides no es muy frecuente pero constituye un problema grave con riesgo de depresión respiratoria y muerte. En 2015 el Ministerio de Sanidad publicó “prácticas seguras para el uso de opioides en el dolor crónico”. Los datos obtenidos en nuestro estudio arrojan resultados esperanzadores, ya que el análisis de frecuencias no ha demostrado un aumento en la prescripción de fentanilo en los pacientes hospitalizados de nuestra unidad. Los resultados definitivos se mostrarán en tablas adjuntas a esta presentación.

I Congreso de Investigadores del PTS. Granada 13-15 Feb. 2019

Modalidad: Póster

Introducción: El cáncer sigue constituyendo una de las principales causas de morbilidad del mundo siendo responsable de 8.8 million de muertes en 2015. Dentro de los tipos de cáncer hemáticos, el linfoma no Hodgkin es el más frecuente. En España se estimó para el 2017 una prevalencia a 5 años de 16.285 casos nuevos. Según el Colegio Americano de Cardiología y la Asociación Americana del Corazón, los pacientes oncológicos que han recibido quimioterapia, especialmente con antraciclinas, altas dosis de ciclofosfamidas o trastuzumab, representan un grupo de alto riesgo para desarrollar una insuficiencia cardíaca. Objetivo: Comparar la variabilidad de la frecuencia cardíaca (HRV) entre supervivientes de linfoma tras el primer año de finalización del tratamiento y sujetos sanos controlando las variables confusoras. Metodología: Se llevó a cabo un estudio descriptivo observacional que incluyó 16 supervivientes de linfoma no Hodgkin y 16 controles sanos apareados por edad y sexo. Se evaluó a corto plazo el tono vagal con un dispositivo Holter de tres canales y se analizó el dominio de tiempo y frecuencia siguiendo una metodología previamente aceptada para evaluar el equilibrio autonómico cardíaco. Resultados: Los resultados del análisis de la covarianza revelaron que la desviación estándar del intervalo NN (F =6.25 p=0.021) y la raíz cuadrada de la media de la suma de las diferencias entre intervalos NN (F = 9.74, p=0.004), fueron significativamente superior en los sujetos sanos que en los supervivientes de linfoma. En el índice HRV no hubo diferencias significativas entre los grupos (F = 0.03, p=0.85), ni en los parámetros del dominio frecuencia LF (F = 1.94, p=0.17) HF (F = 0.35, p=0.55) y ratio LF/HF (F = 3.07, p=0.09). Conclusiones: Los valores de variabilidad de la frecuencia cardiaca fueron menores en los supervivientes de linfoma durante el primer año tras finalizar el tratamiento que en los controles sanos por lo que presentan un desequilibrio cardiovascular en comparación con sujetos sanos apareados.

Capítulo 3
PRESENTACIÓN DE CENTROS

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Modalidad: Póster

El grupo de investigación TEC-01 “Estudio de práctica segura en el uso de medicamentos” del Instituto Biosanitario de Granada (ibs.Granada) es el resultado de la unión de profesionales pertenecientes a la UGC de Farmacia del Hospital San Cecilio y a la Universidad de Granada. Liderado por el Dr. José Cabeza Barrera (Jefe del Servicio de Farmacia, Hospital San Cecilio, Granada), se constituyó en el año 2009 para profundizar en el estudio de la estabilidad química de los medicamentos en condiciones de uso clínico, así como para estudiar las variantes genéticas que intervienen y afectan a la eficacia, toxicidad y dosificación de los medicamentos y su aplicación a la práctica clínica diaria. Además, está también enfocado al estudio y profundización de los resultados en salud del uso de los medicamentos. El grupo, formado por profesionales del ámbito de la asistencia sanitaria y del ámbito académico de la Universidad de Granada, se constituyó como un grupo joven; ha conseguido una proyección ascendente constatable por el aumento de sus publicaciones de impacto, la dirección de tesis doctorales, la consecución de proyectos competitivos nacionales y la participación en importantes proyectos europeos. Mediante la aplicación de nuevas tecnologías, el grupo está contribuyendo al conocimiento científico mediante la aplicación de la farmacogenética a la práctica clínica y terapéutica; y además se está constituyendo como un grupo de referencia nacional e internacional en los estudios de proteínas terapéuticas en condiciones de uso hospitalario.

Entre sus líneas de investigación específicas destacan:

- Estudio de la estabilidad de los medicamentos químicos y proteicos en condiciones de uso clínico.

- Estudio de las prácticas que contribuyen a mejorar la seguridad de los medicamentos en la práctica clínica.

- Estudio de resultados en salud del uso de los medicamentos.

- Estudio de variantes genéticas que afectan a la eficacia, la toxicidad o la dosificación de los medicamentos.

Este grupo de investigación forma parte del área científica “Terápias avanzadas y nuevas tecnologías biomédicas” del ibs.Granada,

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Modalidad: Póster

El Aula del Mar CEI.MAR-UGR es un centro de la Universidad de Granada vinculado al Campus de Excelencia Internacional del Mar (CEI.MAR). Su misión básica es aportar apoyo docente, investigador y de divulgación a los grupos de investigación de la UGR que forman parte de CEI.MAR.

Nuestra Aula del Mar, como el mismo CEI tiene la vocación de ser un punto de encuentro y colaboración entre investigadores e instituciones, donde se den cita todas las temáticas marinas incluidas en las Ciencias, las Ingenierías y las Humanidades. En los últimos años se está percibiendo un especial interés, por parte de los grupos de investigación implicados en CEI.MAR-UGR, en temáticas relacionadas con el estudio y la aplicación de los productos naturales de origen marino, motivo por el que nos ha parecido de interés presentar nuestro centro al conjunto de centros y empresas que constituyen el PTS.

En el Aula del Mar han confluido hasta ahora investigadores interesados básicamente en el estudio de las condiciones oceanográficas generales, en la caracterización ambiental del medio marino, hasta aquellos más biológicos interesados en el estudio de la biodiversidad de los micro y macro-organismos marinos que lo pueblan. El creciente interés de investigadores del campo de Ciencias y Técnicas de la Salud, nos hace pensar que el Aula puede actuar como un centro donde converjan una serie de interesantes sinergias de enorme interés aplicado. Sobre la base ecológica y taxonómica antes comentada, el desarrollo de estudios de ecotoxicología, farmacología, bioquímica, genética, junto a aquellos que tratan de optimizar la actividad física y la salud, tan ligadas al mar, consideramos que el Aula del mar puede ser un centro de gran interés para el entorno del Parque Tecnológico de la Salud.

Dado el claro compromiso del Campus de Excelencia Internacional del Mar con sus instituciones, con su territorio y con la sociedad, nuestra Aula del Mar está especialmente interesada en desarrollar una intensa actividad de divulgación, docencia y transferencia en el entorno de la costa de Granada, donde ya contamos con la colaboración del Puerto de Motril, que ha puesto a nuestra disposición unas instalaciones básicas desde las que comenzaremos a trabajar a partir de esta primavera.

La colaboración con las instituciones y con el tejido empresarial de la costa de Granada y del PTS son algunos de los retos más importantes que queremos desarrollar a lo largo de los próximos años.

Capítulo 4
MEDICINA GENÓMICA

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Modalidad: Oral

Chagas disease (CD) is an infectious pathology caused by the parasitic protozoan Trypanosoma cruzi. CD is endemic from Latin America, however it has become a challenge for other countries given migrations and globalization. Its development includes an acute phase and a chronic phase with digestive or cardiac symptoms. To date, little is known of the genetic component of the disease and it is still unknown why some patients evolve to the chronic phase, while others remain asymptomatic. The goal of our study is to identify novel susceptibility genetic loci associated with CD and chronic chagas cardiomyopathy (CCC). In total, we analyzed 1,505 individuals, classified as seropositive (n=913), seronegative (n=592), seropositive asymptomatic (n=367) and CCC (n=543), by performing a genome-wide association study (GWAS) in individuals from Santander, Colombia. PLINK and EMMAX were used for quality control and population stratification analysis. Genotype imputation was performed using the 1000 genomes project ph3 as reference panel, and EPACTS was used for logistic regression analysis adjusted by age and sex. We analyzed  10 million single nucleotide polymorphisms (SNPs) and despite no variant were identified at genome-wide level (p < 5x10^-08), we were able to identify 24 independent suggestive SNPs (p < 5x10^-05) for CD and 21 for CCC. The most interesting suggestive loci for CD was the IL6, which is key in the inflammatory process during infections. Suggestive loci for CCC include KDM7A, BACH2 and FCRL. Previous studies related BACH2 and FCRL with infectious-inflammatory process in malaria while KDM7A could indirectly affect the embryonic development of heart formation in humans. This initial stage suggests the presence of genetic factors associated with CD and chagas cardiomyopathy. Further studies in well-powered cohorts and in other Latin American populations will be necessary to validate our findings.

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Modalidad: Oral

El locus que contiene el gen SP140 se ha visto asociado, mediante estudios de asociación de genoma completo (GWAS), con esclerosis múltiple (EM) enfermedad de Crohn y leucemia linfocítica crónica (CLL). Todas las variantes asociadas se encuentran en fuerte desequilibrio de ligamiento (LD). El objetivo de este estudio fue determinar el polimorfismo y gen causales de estas asociaciones. Para ello, analizamos los efectos de estas variantes en la expresión de los genes del locus. Encontramos que las variantes más asociadas con EM se correlacionaban con la reducción de la expresión del gen SP140 a nivel de RNA y proteína. Demostramos, que el alelo rs28445040-T, dentro del bloque de LD asociado con EM, era el factor causal de esta reducción de la expresión debido a la producción de un splicing alternativo del exón 7. (1) Con el objeto de comprender por qué la reducción de la expresión de SP140 aumenta el riesgo a padecer EM, se silenció mediante RNA de interferencia en líneas celulares linfoblastoides (LCL) y se determinó, mediante secuenciación de RNA-seq, los genes para los que su expresión se veía alterada. Analizamos estos genes por ontología (GO), comparación de perfiles de transcriptomas, enriquecimiento de factores de transcripción (TF) en los promotores de estos genes y colocalización con variantes de riesgo de GWAS. Identificamos 100 genes cuya expresión estaba incrementada y 22 que estaba disminuida. El análisis GO reveló que los genes afectados por la reducción de la expresión de SP140 estaban involucrados en la regulación de la producción de citoquinas, respuesta inflamatoria y adhesión célula-célula. Observamos un enriquecimiento de NF-k en el promotor de los genes regulados al alza y un aumento de la actividad NF-k en líneas celulares en las que se silenció SP140. Mostramos que había un enriquecimiento de los genes regulados por SP140 en los loci de riesgo a la EM (14,63 veces), la enfermedad de Crohn (4,82 veces) y la enfermedad inflamatoria intestinal (4,47 veces), no observado en otras enfermedades (2). Nuestros hallazgos mostraron que SP140 es un importante represor de genes implicados en la inflamación, lo que sugiere que la disminución de la expresión de SP140, promovida por la variante de riesgo rs28445040-T, puede conducir a una regulación positiva de estos genes mediante la inhibición de NF-k en las células B. (1) Matesanz F, et al. A functional variant that affects exon-skipping and protein expression of SP140 as genetic mechanism predisposing to multiple sclerosis. Hum Mol Genet. 2015; 24(19):5619-27. (2) Karaky M, Fedetz M, Potenciano V, Andrés-León E, Codina AE, Barrionuevo C, Alcina A, Matesanz F. SP140 regulates the expression of immune-related genes associated with multiple sclerosis and other autoimmune diseases by NF-κ inhibition. Hum Mol Genet. 2018; 27(23):4012-4023.

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Modalidad: Oral

Introduction: Meniere disease (MD) is a rare inner ear disorder characterized by vertigo, sensorineural hearing loss (SNHL) and tinnitus. Its prevalence of 75 cases in 100,000 people, although this prevalence fluctuates from 50/100.000 to 110/100.000 attending to different populations. MD has been described mostly in sporadic cases, being familial cases around 10% of total observed cases. The main molecular pathways showing higher differentially expressed genes in the supporting cells of the inner ear are related to cochlea-vestibular innervation, cell adhesion and leukocyte activity. In this study, we search genes that interact with the main signaling pathways in supporting cells of the inner ear.

Materials and methods: We designed a targeted-sequencing panel including genes related with the main molecular pathways in supporting cells and sequenced 860 Spanish sporadic MD patients. The frequency of rare variants (with a MAF inferior to 0.1) in the gene panel was compared with three independent datasets as controls for the gene burden analysis. Variants were classified as loss of function, missense, synonymous and missense with a Combined Annotation Dependent Depletion (CADD) score of 20 or superior (potential pathogenic variants, PPV).

Results: We have observed a burden of PPV in few key genes, including the NTN4 gene, associated with axon guidance signaling pathways in sporadic MD patients. We have also identified pathways and active subnetworks having an enrichment in sporadic MD.

Conclusion: A significant burden of PPV in the NTN4 gene suggests axonal guidance signaling as a novel pathway involved in MD.

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Modalidad: Oral

Systemic sclerosis (SSc) and Crohn’s disease (CD) are complex disorders characterized by chronic deregulation of the immune response. In recent years, genome-wide association studies (GWAS) have identified a number of genetic risk loci associated with SSc and CD, some of which appear to confer susceptibility to both diseases. The aim of our study was to identify new susceptibility loci shared between SSc and CD by performing an exhaustive analysis of this genetic overlap.

For this purpose, we performed a meta-analysis of GWAS data from 4,269 patients (2,281 with SSc and 1,988 with CD) and 7,388 controls, all of them from European-descent populations. The top associated single nucleotide polymorphisms (SNPs) in the discovery phase were selected for replication in additional GWAS datasets comprising 3,453 SSc patients, 2,600 CD patients, and 7,180 unaffected controls. PLINK was utilized for quality control and to perform all statistical analyses. Genotype imputation was performed using Minimac in the Michigan Imputation Server with the Haplotype Reference Consortium as reference panel In addition, in order to study the functional implication of one of the shared susceptibility locus identified, expression levels of the IRF1 gene were compared between 161 cases (135 SSc and 26 CD) and 77 controls.

After meta-analysis of GWAS data from both, the discovery and replication cohorts, we identified 3 new loci shared between SSc and CD, specifically IRF1, STAT3, and ZBTB9-BAK1. The ZBTB9-BAK1 locus has not been previously associated with any of the two analyzed diseases, whereas IRF1 and STAT3 represent new potential susceptibility loci for SSc. Interestingly, these three new shared loci showed opposite allelic effects across SSc and CD. Subsequent in silico functional annotation showed that the top signals within the ZBTB9-BAK1 and STAT3 regions act as expression quantitative trait loci (eQTLs) regulating the expression levels of the TAPBP gene (essential for optimal peptide loading on the MHC class I molecule) and the STAT3 gene (a transcription factor activated in response to cytokines), respectively. Finally, expression analysis of IRF1, which plays a pivotal role in the regulation of immune responses, revealed altered expression levels of this gene in SSc and CD compared with healthy controls.

In conclusion, through the first comprehensive large-scale analysis on the genetic overlap between SSc and CD, we have identified three new susceptibility loci shared between both diseases, all of them showing opposite allelic effects. This suggests that the risk of suffering from one disease could be related to a reduced risk of suffering from the other one.

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Modalidad: Oral

Background/Purpose: Systemic autoimmune diseases (SADs) are chronic inflammatory conditions with autoimmune aetiology and many common clinical features, difficulting diagnosis and adequate treatment decisions. Finding new treatments or applying the existing ones in a more effective way is especially hard in SADs due to the heterogeneity of molecular mechanisms within the same disease class. Based on this premise, the first step towards establishing a precision medicine strategy for SADs is to reclassify these conditions at the molecular level, which might result in a more homogenous stratification in terms of pathological molecular pathways. SADs have a multi-factorial predisposition, where the interplay between genetic, epigenetic and environmental conditions is essential in the pathogenesis of the diseases. Thus, in order to capture as many aspects as possible the molecular stratification is performed using multiple layers of information (e.g. genome, transcriptome, methylome or metabolome). Among all available molecular levels of information, the most informative in terms of functionality and dimensionality are transcriptome and methylome, reflecting different aspects of regulation and environmental influence, respectively, giving a wide view of the molecular background.

Methods: We performed an unsupervised integrative clustering analysis to classify SADs patients into subtypes based on genome-wide trancriptome and methylome profiling of  800 cases distributed across 7 different clinical entities (rheumatoid arthritis, systemic lupus erythematosus, systemic sclerosis, primary Sjögren’s syndrome, primary antiphospholipid antibody syndrome, mixed connective tissue disease and undifferentiated connective tissue disease) and  200 healthy individuals.

Results: Interestingly, patients with different diagnoses were grouped statistically into new groups in terms of molecular functions. These results were replicated in two independent subsets of patients. The new groups of patients are characterized by a major subdivision, where some clusters show an increased inflammatory response and neutrophil degranulation functions, while others are enriched in lymphocyte proliferation and differentiation signatures. This major signal is subdivided into more specific subgroups defined by functional signatures such as type I interferon signaling, complement activation or neural functionalities among others.

Conclusion: This is the first attempt of integrating and characterizing SADS patients based on molecular profiles. The results show that we are able to identify new groups of patients sharing molecular features that do not reflect the clinical diagnoses. This new molecular classification might suppose a first step through precision medicine in SADS.

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Modalidad: Oral

Although circulating microRNAs (miRNAs) can modulate gene expression and affect immune system response, little is known about their participation in age-associated frailty syndrome and sarcopenia. The aim of this study was to determine miRNAs as possible biomarkers of age and frailty and their correlation with oxidative and inflammatory state in human blood. Three inflammation-related miRNAs (miR-21, miR-146a, and miR-223) and one miRNA related with the control of melatonin synthesis (miR-483) were analyzed. Twenty-two healthy adults, 34 aged robust, and 40 aged fragile patients were selected for this study. The expression of plasma miRNAs was assessed by RT-qPCR; plasma cytokines (IL-6, IL-8, IL-10, and TNFα) were analyzed by commercial kits, and plasma advanced oxidation protein products (AOPP) and lipid oxidation (LPO) were spectrophotometrically measured. Fragile subjects had higher miR-21 levels than control subjects, whereas miR-223 and miR-483 levels increased at a similar extend in both aged groups. All cytokines measured increased in aged groups compared with controls, without differences between robust and fragile subjects. The fragile group had a TNFα/IL-10 ratio significantly higher than robust and control groups. Aged groups also had higher AOPP and LPO levels than controls. Women presented higher AOPP and LPO levels and increased expression of miR-483 compared with men. Positive correlations between miR-21 and AOPP and between miR-483 and IL-8 were detected. The expression of miR-21 and the TNFα/IL-10 ratio were correlated positively with the presence of frailty, which suggests that these markers can be considered as possible biomarkers for age-related frailty.

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Modalidad: Póster

Background: Prostate Cancer (PCa) is a cause of public concern in the Western World. Within the prostate, the isozyme steroid 5α-Reductase (5α-R) converts circulating testosterone (T) into dihydrotestosterone (DHT), the primary androgen responsible for the development, maturation and function of the prostate gland and it is also implicated in the pathogenesis of prostatic diseases. Currently, there are no prognosis biomarkers for PCa, but the need for personalized treatment for each patient illustrates that the discovery of new markers are becoming increasingly urgent. DNA methylation is an important epigenetic mechanism for gene expression regulation, and plays an essential role in the initiation and progression of tumours, where hypermethylation of critical genes are associated with gene silencing. Thus, this epigenetic mark could be a potential biomarker and a target for treating PCa. Epigenetic research uses powerful techniques for the study of DNA methylation, such as sodium bisulfite modification of DNA associated with polymerase-chain-reaction procedures. One of these approaches is the Methylation-Sensitive High Resolution Melting (MS-HRM), a new sensitive and specific method for the detection of methylation. It allows analyzing the methylation status of an unknown sample by comparing its dissociation or melting profile with the melting profiles of DNA controls with a known percentage of methylation. We hypothesized that the methylation status of CpG islands in the promoter region of SRD5A genes may play a role in the development and progression of PCa. The objective of this study is to stablish an optimal workflow using MS-HRM in order to detect changes in the methylation levels of SRD5A1 and SRD5A2 promoters, in normal and malignant prostate tissues from patients with different grade of PCa.

Patients and Methods: We used formalin-fixed paraffin-embedded (FFPE) tissue samples from 20 patients with a different grade of PCa (n=11 low-grade PCa; n=9 high-grade PCa). Due to the challenging use of this type of starting material, we stablished an optimal methodology to isolate the DNA with the highest concentration and quality and we optimized the design of primers for a MS-HRM downstream analysis.

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Modalidad: Póster

La expresión génica se ha convertido en un área de investigación de suma importancia en patología forense con la finalidad de conocer mejor, a nivel molecular, el proceso de muerte. Con el objetivo de proponer nuevos marcadores moleculares de isquemia miocárdica de uso potencial en el diagnóstico postmortem de daño miocárdico isquémico en casos de muerte súbita cardíaca (MSC), se han analizado los cambios en los patrones de expresión génica en relación con la causa de muerte, de varias moléculas relacionadas con la fisiopatología de la isquemia miocárdica y su reparación. En este sentido, determinamos los niveles de ARNm de cinco proteínas: Troponina T cardíaca (TNNI3), la cadena ligera de la Miosina (MYL3), el factor de crecimiento trasformante Beta 1 (TGFB1), la metaloproteinasa de matriz 9 (MMP9) y el factor de crecimiento de endotelio vascular A (VEGFA), en sitios específicos del miocardio, en sangre y en líquido pericárdico en muestras de 30 cadáveres con diferentes causas de muerte: MSC, politraumtismos, asfixias mecánicas y otras muertes naturales. La expresión de TNNI3 en sangre y la expresión de MMP9 en el líquido pericárdico fueron significativamente mayores cuando la causa de la muerte fue la asfixia mecánica, probablemente debido a la respuesta más sensible de estas proteínas a la hipoxia / isquemia sistémica aguda. Específicamente, entre los casos de MSC, se encontraron valores incrementados de MYL3, VEGFA y MMP9 en la pared anterior del ventrículo derecho cuando la causa confirmada de muerte fue un infarto agudo de miocardio (IAM). Por otro lado, en los casos de MSC isquémica se encontró una mayor expresión de TGFB1 en el tabique interventricular cuando el IAM no fue la causa de la muerte, probablemente como un reflejo de la corta duración de la isquemia. De este modo las técnicas de biología molecular pueden proporcionar herramientas complementarias para el diagnóstico forense del daño miocárdico isquémico temprano y del IAM, y pueden permitir determinar la duración y la gravedad de la isquemia miocárdica.

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Modalidad: Póster

Platelet transplantations are essential to treat patients with thrombocytopenias who show a decrease in the number of circulating platelets in the bloodstream. Nowadays, peripheral blood from healthy donors is the only source of platelets in clinic.

Human platelet production from several hematopoietic stem cells sources has been succesfully reported. Human pluripotent stem cells (hPSCs) represent a potential donor-independent source of platelets which could constantly provide hospitals with these blood components, due to their unlimited growth capability in vitro. Although there have been some advances in this field, the production of platelets from hPSCs is still inefficient and more effective protocols are required. A posibility may be trying to reproduce physiological conditions found in the bone marrow niche where megakaryopoiesis occurs.

We analyse the role of hypoxia in megakaryopoiesis from hPSCs in vitro. Our results demonstrate that hypoxia reduces cell viability of hPSCs selecting progenitors with a higher megakaryopoietic potential. Importantly, an increase in the number of both mature megakaryocytes and platelets derived from hPSCs was observed. Recently, our group showed that SCL-overexpression potentiated megakaryopoiesis from hPSCs. However, hypoxia reduces megakaryocyte production in SCL-overexpressing hPSCs. A more detailed molecular analysis has allowed us to demonstrate that hypoxic conditions accelerate SCL degradation through MAPK mediated-phosphorylation and proteasome degradation.

These results have allowed us not only to increase our understanding of the molecular mechanisms controlling human megakaryopoiesis from hPSCs, but also to improve our current megakaryocytic differentiation protocols.

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Modalidad: Póster

Background: Systemic Sclerosis (SSc) is a complex systemic autoimmune disorder characterized by fibrosis of the skin and internal organs. Genetics and environmental factors contribute both to the etiology of the disease. Most variants discovered by GWAS locate in non-coding regions, which impedes immediate interpretation. Expression quantitative trait locus (eQTL) mapping is one tool to discover the molecular mechanisms by which SSc- genetic variants exert their risk. Methods: In this study, we performed eQTL analysis for 24 known SSc associated SNPs using GWAS and RNA-Seq data derived from whole blood samples of 240 SSc patients and 380 healthy control subjects. All samples analyzed are of European ancestry and form part of the PRECISESADs project dataset. We used matrixEQTL with PCA cofactors to eliminate confounding effects. Results: We show that SSc-associated variants have widespread effects on genome-wide DNA expression levels. By means of stratified and interaction analyses we further show the disease-specific context of SSc-eQTL variants. Interestingly, in SSc patients we found six independent variants, which affect expression levels of the SPARC gene an effect not seen in control subjects. SPARC is overexpressed in SSc and related to the profibrotic effect of TGFbeta. We modeled the expression of SPARC using both variants and assessed the variance explained. Conclusion: Our results show how SSc context-specificity works at the molecular level and serve to illustrate the possible regulatory downstream effects of risk variants. This will ultimately inspire the generation of new hypotheses needed to increase our understanding of the biology of SSc and autoimmunity.

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Modalidad: Póster

La infertilidad masculina es uno de los grandes problemas de salud de las sociedades desarrolladas actuales. Este problema afecta al 15% de las parejas en edad fértil. Una de sus manifestaciones más comunes es la azoospermia, que se divide en azoospermia obstructiva (OA) y azoospermia no obstructiva (NOA), siendo esta última la más grave. NOA se caracteriza por la incapacidad del testículo de producir espermatozoides, normalmente por un fallo en el proceso de espermatogénesis. Esta enfermedad se asocia principalmente a factores genéticos. Por ejemplo, en numerosos estudios se han identificado aberraciones genéticas (tales como anomalías del cariotipo y microdeleciones del cromosoma Y) implicadas directamente en el desarrollo de NOA. Aun así, las causas conocidas sólo explican el 15% de los casos y el resto de pacientes se clasifican como idiopáticos. Los estudios de gen candidato realizados durante las últimas décadas han mostrado que las variaciones genéticas comunes, en concreto los polimorfismos de un solo nucleótido (SNPs), parecen jugar un papel central en la susceptibilidad a desarrollar NOA. Respecto a los estudios genéticos a gran escala, sólo existen dos estudios de asociación de genoma completo (GWAS) consistentes, ambos realizados en poblaciones Han de China y sin replicación en poblaciones no asiáticas. Además, se ha visto que la mayoría de SNPs asociados a enfermedades complejas se localizan en regiones no codificantes del genoma, que suelen afectar a la expresión de los genes causales del fenotipo patológico. Así, los estudios que integran datos genómicos y transcriptómicos han permitido avanzar considerablemente en el conocimiento de la fisiopatología de muchas enfermedades complejas. No obstante, enfermedades como NOA aún no han podido beneficiarse de este tipo de estudios en todo su potencial. Por ello, el objetivo principal de nuestra línea de investigación es llevar a cabo el primer estudio genético a gran escala sobre la infertilidad masculina debida a NOA en una población amplia de origen europeo. Para ello, pretendemos realizar un GWAS en 700 pacientes españoles con NOA y relacionar esos datos con los datos obtenidos de la secuenciación masiva del transcriptoma de muestras de biopsias testiculares de 100 de esos individuos. Además, realizaremos una anotación funcional de los resultados obtenidos utilizando distintas bases de datos públicas y herramientas bioinformáticas, con el fin de identificar los genes y rutas moleculares causales de la enfermedad.

Palabras clave: Genética de la infertilidad masculina, SNP, GWAS, NOA, eQTL.

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Modalidad: Póster

TCERG1 is a nuclear protein involved in transcription and splicing regulation. TCERG1 binds to transcription and splicing components, localizes at the interface of nuclear speckles and what are presumably nearby transcription/splicing sites, and affects the transcriptional activity of CCAAT / enhancer-binding protein alpha (CEBPA) and the alternative pre-mRNA splicing of several splicing reporters. Based on these data, TCERG1 has been suggested to couple the transcribing RNA polymerase II (RNAPII) with spliceosome complexes to regulate co-transcriptional splicing events. We recently found support for this hypothesis by showing that TCERG1 regulated the alternative splicing of the BCL2L1 gene by modulating the rate of RNAPII transcription.

Recently, we have identified and characterized the speckle-targeting signal of TCERG1 that might participate in the coordination of transcription and splicing. In an effort to investigate the mechanism of TCERG1 recruitment to active processing sites, we identified a nuclear protein that specifically interacts with the speckle-nuclear localization signal of TCERG1. Surprisingly, this protein was NOLC1, a nucleolar phosphoprotein that shuttles between the nucleolus and the Cajal body, which have been implicated in the biogenesis of the small nuclear ribonucleoproteins (snRNPs) to form the spliceosome. Here, we present data concerning the biochemical characterization of this novel interaction, the requirement of TCERG1 for correct Cajal body formation, and the involvement of TCERG1 in regulating snRNPs biogenesis. Our studies provide new insights into the spatial organization and dynamics of transcription and pre-mRNA processing within the highly compartmentalized eukaryotic nucleus, which are fundamental to fully understand how the regulation of gene expression is exerted in the cell.

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Modalidad: Oral

Antecedentes: La estimación de la edad del sujeto forma parte del complejo proceso de identificación, constituyendo un desafío que se presenta con relativa frecuencia en la práctica pericial forense. Sin embargo, la precisión de los métodos más comúnmente utilizados se reduce notablemente en la edad adulta. En la búsqueda de nuevos métodos para estimar la edad, los estudios más recientes se han centrado en las alteraciones que se producen en las biomoléculas durante el proceso natural de envejecimiento (racemización del ácido aspártico, glicación no enzimática de las proteínas, deleciones del ADN mitocondrial, acortamiento telomérico y metilación del ADN). A pesar de que los dientes son una excelente fuente de ADN, especialmente cuando se dispone únicamente de restos esqueletizados, muy pocos estudios los han incluido en sus análisis.

Objetivos: Determinar la correlación entre la longitud telomérica relativa, medida por qPCR en 91 dientes de individuos de sexo y edad cronológica conocida entre los 15 y 85 años, y la edad, y proponer un modelo de regresión estadística para estimar la edad del sujeto. En segundo lugar, evaluar la correlación entre los niveles de metilación, medidos por pirosecuenciación, de 21 sitios CpG ubicados en los genes ELOVL2, ASPA y PDE4C, seleccionados entre los genes más informativos, y la edad, así como comparar estos resultados con los obtenidos tras medir la longitud telomérica relativa en el mismo conjunto de muestras (65 dientes de individuos de sexo y edad conocida entre los 15 y 85 años), con el fin de evaluar la precisión de ambos biomarcadores para predecir la edad.

Resultados: Los resultados mostraron una correlación negativa significativa entre la edad y la longitud del telómero. Sin embargo, la ecuación propuesta para predecir la edad ofreció un error medio de 9.85 años. Por su parte, los niveles de metilación en los genes ELOVL2 y PDE4C se correlacionaron de forma positiva y significativa con la edad. Sin embargo, aunque se encontró una correlación negativa para el gen ASPA, esta no fue significativa. Empleando la regresión cuantílica, y considerando ambos marcadores, se obtuvo un modelo preliminar para la predicción de edad que proporcionó un error absoluto medio de 4.04 años, que aumentó ligeramente hasta los 4.16 años cuando se excluyó la longitud telomérica del modelo.

Conclusiones: La estimación de la edad basada en métodos moleculares aplicados en ADN dental se presenta como un procedimiento novedoso y útil, especialmente en aquellos casos en los que solo se disponga de restos esqueletizados, siendo la metilación del ADN el biomarcador más predictivo.

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Modalidad: Póster

Introduction: Meniere disease (MD) is a rare inner ear disorder characterized by vertigo, sensorineural hearing loss (SNHL) and tinnitus with a prevalence of 75 cases in 100,000 people. Although most cases are considered sporadic, familial aggregation exists among 10% of MD cases, supporting a genetic background for this disease. Several genes have been described in familial MD such as DTNA, FAM136A, PRKCB, DPT and SEMA3D genes, showing genetic heterogeneity. Thus, the goal of this study is to define new candidate genes for familial MD.

Materials and Methods: We recruited 62 familial MD cases, whose DNA was isolated from blood or saliva samples to perform whole-exome sequencing. Variant calling was performed with the Genome Analysis Tool Kit (GATK), following the GATK Best Practices Pipeline. Candidate genes were prioritized based on predicted variant pathogenicity and phenotypic similarity of diseases associated with the genes harboring these variants using the PhenIX pipeline. Motivated by the results with PhenIX, a single rare variant analysis (SRVA) focused on SNHL genes was performed to identify rare variants with a strong effect on MD using as a cutoff a minor allele frequency <0.001. In parallel to the SRVA, a gene burden analysis (GBA) focused on SNHL genes was performed to analyze the interaction of multiple common and rare variants. We increased the MAF value up to <0.05 to simulate variants interaction. Finally, we studied and compared the relationship between rare variants and common variants which modulate gene expression according GTEx Portal in our MD cohort with a Spanish control database (http://csvs.babelomics.org/) and the controls available in the 1000 Genomes Project.

Results: PhenIX pipeline showed that 40% of familial MD cases carried, at least, a novel or ultrarare variant in genes related with SNHL. These variants are likely pathogenic according to its Combined Annotation Dependent Depletion (CADD) value since it is higher than 15. Ninety-four rare likely pathogenic variants were selected following the SRVA pipeline. Nevertheless, these variants are mostly specific to a particular family (private variants), supporting the hypothesis that familial MD shows a genetic heterogeneity involving several genes. A total of 222 rare likely pathogenic variants were retrieved with the GBA. After Bonferroni correction, OTOF gene was the gene with a higher enrichment of rare likely pathogenic variants. Two rare variants present in our cohort showed a significant association with two common variants which modulate the OTOF expression compared with Spanish and 1000 Genomes controls.

Conclusion: At least a novel or ultrare variant in SNHL genes was found in 40% of familial MD cases, suggesting a strong effect of these genes in MD phenotype. Among them, OTOF gene showed a significant accumulation of rare variants. Two of these variants are associated to two common variants in patients with MD and they regulate OTOF gene expression.

I Congreso de Investigadores del PTS. Granada 13-15 Feb. 2019

Modalidad: Oral

Objective: Sjögren’s syndrome (SjS) is a systemic autoimmune disease characterized by lymphocytic infiltration and tissue damage of exocrine glands, mainly salivary and lacrimal glands. The etiology of SjS is complex and both environmental taggers and genetic factors are involved. Epigenetic alterations such as DNA methylation are also relevant and can be integrators of the genetic-environment interaction. The aim of this study is to discover novel epigenetic associations and investigate the possible genetic control for associated DNA methylation profiles in SjS patients.

Material and Methods: We have conducted an epigenome-wide association analysis using the Infinium MethylationEPIC BeadChip (Illumina, USA) in whole blood samples from a total of 234 SjS patients and 319 healthy individuals. All samples are of European ancestry and form part of the PRECISESADS project. Through genome-wide methylation quantitative trait loci (meQTL) analysis we identified genetic variants controlling DNA methylation levels at the identified differentially methylated sites, and further explored their link to the disease.

Results: An overall hypomethylation was observed in SjS patients, especially in genes involving interferon signaling. In addition, our integrative analysis showed a widespread effect of genetic variants on SjS-associated DNA methylation sites. Interestingly, we found a genetic variant located within a LincRNA strongly associated in trans- with 6 DNA methylation sites, all of them on interferon-related genes such as IFIH1, DDX6, PARP9-DTX3L. We also observed genetic variants associated in cis- with HLA class I DNA methylation. All results were replicated in an independent cohort.

Conclusion: Our results illustrate a molecular mechanism by which genetic variants exert their risk for SJS susceptibility through alteration of DNA methylation levels, especially in interferon related genes, key in the pathogenesis of SjS.

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Modalidad: Póster

BACKGROUND: An adequate gestational weight gain (GWG) is essential for a healthy pregnancy for both, the mother and foetus. Thus, excessive GWG is directly associated with higher adiposity in the offspring and greater complications during pregnancy. Maternal adiposity or excessive GWG can also affect placenta function. Very related to placental function is the placental integrity of mitochondria and mitochondrial DNA (mtDNA). In fact, alterations in mtDNA density (copy number) have been related to higher risk of placental abruption. Moreover, mitochondrial mutations such as deletions can condition bioenergetics capacity of this tissue, and its exposure to oxidative stress. AIMS: To investigate the influence of GWG during pregnancy on the placental mtDNA copy number and complex I deletion. METHODS: Thirty pregnant women (31.8±4.6 years old, body mass index: 24.8±4.7 Kg/m2) were included in these analyses. Differences in body weight from 16th gestational week until 34th gestational week were registered. Placenta was extracted and processed. RT-PCR was used to determine mtDNA copy number and ND1/ND4 deletion. RESULTS: Mean GWG until 34th week of gestation was 10.7±4.1Kg, which can be considered high for that gestational stage1. GWG was associated with lower mitochondrial copy number (r=-0.539, p=0.002) and greater mitochondrial DNA deletions (r=0.427, p=0.019). CONCLUSION: GWG was associated with worse placental status, which might be mediated through impaired mitochondrial bioenergetics and antioxidative capacity induced by excessive adiposity.

Key words: pregnancy, weight gains, placenta; mitochondria; DNA.

Funding: This study was partially funded by the Regional Ministry of Health of the Junta de Andalucía (PI-0395-2016).

References: 1.Cheikh Ismail L, Bishop DC, Pang R, et al. Gestational weight gain standards based on women enrolled in the Fetal Growth Longitudinal Study of the INTERGROWTH-21st Project: a prospective longitudinal cohort study. BMJ (Clinical research ed) 2016;352:i555.

Capítulo 5
SALUD PÚBLICA

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Modalidad: Póster

Introducción:El embarazo constituye un estado fisiológico que forma parte de la vida reproductiva de la mujer. Sin embargo, conlleva una serie de modificaciones en el metabolismo materno que en algunos casos pueden actuar como factores de riesgo para el desarrollo de patologías durante el transcurso del mismo. Algunos estudios han descrito que los biomarcadores (triglicéridos, prolactina, glucosa y colesterol) experimentan una mayor elevación en gestantes diabéticas, hipertensas y obesas desarrollando un mayor riesgo de sufrir preeclampsia. También, la Enfermedad Periodontal tiene un potencial directo e indirecto para influir en la salud materno-infantil. La descripción del comportamiento en distintas poblaciones de embarazadas (sanas y de riesgo) permitiría establecer la relación de los mismos con algunas de las alteraciones que aparecen con mayor frecuencia en la gestación. Objetivo:El objetivo es determinar la evolución de los perfiles de lípidos, a través de la creación de modelos predictivos, que ayuden a establecer umbrales, por encima de los cuales el aumento de los lípidos deja de ser considerado como algo fisiológico y se convierte en patológico. Así como, determinar la relación entre la enfermedad periodontal y las complicaciones del embarazo. Diseño/metodología:Se está llevando a cabo un estudio de cohorte con mujeres durante el embarazo y la lactancia. Las mujeres participantes se dividen en dos grupos. Uno integrado por mujeres sanas y el otro embarazadas con antecedentes de riesgo. Se recogen en cada grupo los antecedentes personales, familiares, así como una historia clínica detallada. También, se realizan varios controles analíticos a lo largo de la gestación, así como una evaluación bucodental completa. La captación de la muestra se efectúa en las consultas de Ginecología del Hospital Virgen de las Nieves en el Complejo Hospitalario Universitario de Granada (España). La creación de un modelo predictivo de los niveles de biomarcadores en los distintos meses de embarazo y en las distintas patologías de la gestante, puede ser muy eficaz para conocer los riesgos que suponen para la madre y para el bebé.

Referencias bibliográficas 1. United Nations General Assembly. United Nations Millennium Declaration.A/RES/55/2. 1-9-2000. UN General Assembly, 55th session, agenda item 60(b).(ODM) 2. Ukah V, De silva D et al. Prediction of adverse maternal outcomes from pre-eclampsia and other hypertensive disorders of pregnancy: A systematic review. Pregnancy Hypertension 11 (2018) 115-123 3. Andrietti S, Silva M et al. Competing-risks model in screening for pre-eclampsia by maternal factors and biomarkers at 35-37 weeks’ gestation. Ultrasound Obstet Gynecol. 2016 Jul;48(1):72-9. doi: 10.1002/uog.15812. Epub 2016 4. 5. Aguilar- Cordero MJ, Rivero-Blanco T, Leon-Rios X, Rodriguez-Blanque R, Gil-Montoya JA. Periodontal Disease as a risk factor for complications during pregnancy and childbirth. JONNPR. 2018

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Modalidad: Póster

INTRODUCCIÓN Las aftas bucales son pequeñas llagas redondas que pueden producirse por una infección viral, estrés, alergias a los alimentos, falta de vitaminas y minerales, cambios hormonales o periodos menstruales. No son contagiosas, y generalmente no se necesita tratamiento cuando son leves. Sin embargo, las aftas grandes o dolorosas requieren atención médica. Los factores de riesgo que desencadenan la aparición de las aftas son:

-Limpieza dental agresiva.

-Pasta dental y enjuagues que contienen dodecilsulfato sódico.

-Enjuagues bucales con el esteroide dexametasona o lidocaína.

-Situaciones de estrés.

-Alimentación: comida picante o muy ácida, bebidas gaseosas y especias, frutas y vegetales como piñas o tomates.

-Enfermedades gastrointestinales como la celiaquía o la enfermedad de Crohn.

-Productos que se apliquen sobre las mucosas.

Actualmente los casos graves de aftas tienen tratamientos muy agresivos, ya sea porque incluyen medicamentos o consisten en tratamientos invasivos (cirugía), o bien su acción está sujeta al grado de retención de la formulación en el lugar de acción. Por todo ello, se establece la necesidad de desarrollar tratamientos no invasivos que incluyan componentes de demostrada eficacia como rellenadores de tejido y que presenten un alto grado de adherencia. INVES BIOFARM posee una larga trayectoria en desarrollo y fabricación de implantes de relleno dérmico a base de componentes biotecnológicos, principalmente ácido hialurónico. Además está especializada en el manejo de proteínas recombinantes, obteniendo una patente para la estabilización de las mismas en medio oleoso. Por este motivo se decide transferir este know-how al desarrollo de formulaciones destinadas a la mucosa bucal.

OBJETIVO Desarrollar formulaciones para el tratamiento de enfermedades periodontales y de aftas bucales que mejoren la evolución de dichas alteraciones sin suponer un tratamiento invasivo.

-Investigar las características necesarias de las formulaciones con un alto grado de adhesión.

-Definir los agentes y procesos de encapsulación necesarios para proteger los activos frente a su degradación y prolongar su efecto en el tiempo.

-Determinar la estabilidad de las formulaciones propuestas.

-Incorporar una herramienta tecnológica que permita realizar una gestión integral de todos los procesos de Investigación y Desarrollo, de forma que se garantice la calidad de los procedimientos y se realice un seguimiento de toda la información generada.

MÉTODOS Se han desarrollado geles de hialuronato sódico y alginato de sodio, como base de micropartículas. Por otra parte se ha creado una matriz con base HA para su aplicación en encía con propiedades adhesivas para permanecer en el lugar diana y liberar los activos en el tiempo.

RESULTADOS Como resultados se han obtenido micropartículas estables para ser incorporadas en formas de administración tópica para el tratamiento de aftas bucales.

CONCLUSIÓN Se plantea a futuro un ensayo de eficacia.

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Modalidad: Póster

INTRODUCCIÓN El acné es una enfermedad común que afecta a casi el 80% de las personas en algún momento de su vida. Suele presentarse en cara, pecho y espalda. Puede producir lesiones inflamatorias, asociadas a alteraciones en el aspecto exterior, lo cual afecta a la autoestima del paciente.

OBJETIVO El objetivo general de este estudio es determinar la eficacia, seguridad y grado de satisfacción de una preparación de ácido hialurónico, factor de crecimiento y caléndula para el tratamiento del acné inflamatorio y cicatrices de acné. REPAIR PLUS^® y WIOTECH ACNÉ^®.

METODOLOGÍA Se lleva a cabo un ensayo clínico no controlado, con 30 pacientes, 18 hombres de 13 a 30 años y 12 mujeres de 13 a 38 años, con acné inflamatorio activo y cicatrices de acné. En la primera consulta, se tomaron los datos generales, se clasificó el tipo de acné, su severidad y el tipo de cicatrices y su severidad. La duración del tratamiento fue de 3 semanas, con un total de 5 sesiones de tratamiento con REPAIR PLUS^® empleando un equipo de electroporación, acompañado de un tratamiento domiciliario diario con Wiotech Acné^®. En cada consulta y antes de cada tratamiento se tomaron fotografías para detectar la mejoría de forma objetiva y clara. Los datos obtenidos fueron clínicamente analizados, con un análisis de tipo analítico.

RESULTADOS El tamaño de la muestra fue de 30 pacientes, terminaron 28 pacientes el tratamiento, 6 de ellos con acné de tipo Pápulo-Comedoniano Leve, 18 con acné Pápulo-Comedoniano Moderado, 3 con acné Pápulo-Pustuloso Moderado y 1 con acné Pápulo-Pustuloso Severo. Tras el tratamiento, 21 de los 28 pacientes presentaron una mejoría del 80% y el 75% tuvieron un alto grado de satisfacción, por la reducción clínica significativa de su acné y la disminución de sus cicatrices, específicamente por la disminución del eritema y la pigmentación, además de encontrar la piel más suave y con un tono brillante.

DISCUSIÓN Dos estudios previos han demostrado que el Factor de Crecimiento Epidérmico tópico puede mejorar la apariencia de las cicatrices atróficas del acné, el presente estudio es el más grande realizado según la bibliografía revisada y al encontrar resultados similares se aumentará el tamaño a 50 pacientes como parte importante en el tratamiento del acné y en las cicatrices que esta enfermedad produce.

CONCLUSIONES Se ha comprobado la eficacia y seguridad de la preparación de ácido hialurónico, factor de crecimiento y caléndula para el tratamiento del acné inflamatorio. Adicionalmente ninguno de los pacientes que terminaron el estudio reportaron efectos adversos debidos al tratamiento. El estudio ha demostrado que este tipo de tratamiento ayuda a mejorar no solo el acné pápulo comedoniano leve y moderado como enfermedad, sino también las cicatrices tipo Boxcar de leves a moderadas como complicaciones de la misma.

PALABRAS CLAVE Acné, ácido Hialurónico, EGF.

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Modalidad: Póster

Background: Bisphenol A (BPA) is associated with children’s behavior problems. However, few epidemiological studies have also analyzed associations with cognitive function.

Objective: To study if urinary BPA concentrations were associated with cognitive traits and intelligence quotient (IQ) among boys.

Methods: Urinary BPA concentrations and cognitive function were assessed in 269 boys from the INMA-Granada cohort at 9-11 years of age. Child cognition was evaluated by a trained psychologist using a comprehensive neuropsychological battery of tests. Cross-sectional associations were analyzed using linear regression models.

Results: After adjusting for confounders, boys in the third and fourth quartile of BPA concentrations showed better processing speed than boys in the first quartile [β(SE)=5.47(2.02)*] and [β(SE)=3.57(2.01)*] respectively, while boys in the third quartile showed better interference [β(SE)=1.56(0.94)*] and impulsivity [β(SE)=-4.19(2.29)*]. Boys in the fourth quartile showed poorer working memory scores than those in the first quartile [β(SE)=-1.09(0.50)*]. However, when creatinine-standardized BPA concentrations were used, all of these previous associations were attenuated.

Conclusions: Our results do not support a consistent association between urinary BPA concentrations and cognitive function or IQ. Although more studies are needed, our findings suggest that BPA could be predominantly associated with children’s behavior.

*Statistically significant (p-value lower than 0.05)

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Modalidad: Póster

Introduction: Metabolic syndrome (MetS) is increasing in both young and adult populations. Beyond lifestyle, accumulation of persistent organic pollutants (POPs) in adipose tissue has been proposed as an additional risk factor.

Methods: Adipose tissue samples were collected from 117 patients undergoing a surgical intervention in two hospitals from Southern Spain. Several organochlorine pesticides (OCPs) and polychlorinated biphenyls (PCBs) were measured to estimate long-term exposure to these compounds. Waist circumference (WC), systolic and diastolic blood pressure (SBP and DBP, respectively), as well as serum glucose, triglycerides and HDL cholesterol were quantified. Participants were classified as MetS+ when they have at least 3 out of 5 MetS components. The association between concentrations of selected POPs and MetS components were examined using both logistic and linear regression analyses.

Results: One third of the sample population was male (36.8%) and median age was 44 years. 41 participants (35.0%) showed a clinical diagnosis of MetS. WC was positively correlated with concentrations of all OCPs. Higher fasting blood glucose levels were related to higher HCB and γ-HCH concentrations, while the rest of OCPs and PCBs were not associated with this MetS component. HCB was inversely associated with HDL cholesterol levels after adjusting for age and gender, while PCB-180 and HDL cholesterol were positively associated. Concentrations of HCB and γ-HCH were borderline correlated with higher triglycerides levels. DBP and SBP levels were positively associated with exposure to HCB and γ-HCH, while PCB-138 was also positively associated with SBP. Both unadjusted and adjusted logistic models for age and gender revealed that exposure to HCB and γ-HCH was related to an increased risk for MetS [ORs (95%CI) 1.53 (1.22-1.92) and 1.39 (1.10-1.76) respectively; p <0.01]. On the contrary, adipose tissue concentrations of other OCPs and PCBs were not associated with the risk of MetS.

Conclusions: Our findings shed light on the ability of long-term accumulated POPs in adipose tissue to increase the risk of MetS components, as well as the risk of MetS. Given the enormous economic cost expenditure derived from MetS patients, the identification of modifiable risk factors is a need for developing preventive public health interventions.

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Modalidad: Póster

INTRODUCCIÓN Más del 80% de las aceitunas que entran a la almazara se convierten en alpeorujo que se transporta a las denominadas orujeras donde se obtiene aceite de orujo mediante extracción con hexano. El orujillo es el subproducto derivado de este proceso de secado y extracción, y se emplea frecuentemente como biomasa para combustión y obtención de bioenergía. Todavía existe un gran margen de mejora en el aprovechamiento de todas las corrientes y residuos generados desde el cultivo hasta la producción del aceite. La principal innovación que incorpora el proyecto es la obtención de micro y nanocelulosas a partir del alpeorujo. OBJETIVO Desarrollar nuevos procesos de biorrefinería para la transformación sostenible del alpeorujo en nanocelulosas y compuestos bioactivos, estudiando su incorporanción en productos cosméticos, en fertilizantes y biomasa vegetal. El modelo de biorrefinería se puede aplicar a instalaciones como las orujeras y permitiendo de este modo mejorar su viabilidad técnico-económica y ambiental. Sin embargo, este concepto no se ha desarrollado en la práctica en España por lo que el presente proyecto se constituye como una iniciativa pionera. Necesidad de desarrollar polímeros naturales en cosmética La búsqueda de compuestos de origen natural está creciendo exponencialmente debido al aumento de la demanda de productos naturales que sean sostenibles. Investigar nuevas fuentes de material lignocelulósico que provenga de los residuos agroalimentarios es clave para reducir la dependencia de los recursos forestales y por tanto, asegurar la sostenibilidad de dicha producción. Necesidad de microencapsular ingredientes cosméticos con materiales novedosos. Muchos principios activos usados en cosmética, presentan una tendencia a la oxidación y degradación química. Para esto desde hace años se están desarrollado sistemas de microencapsulados que permiten proteger los activos y liberarlos de manera gradual. El empleo de micro/nanofibras de celulosa, permite reducir su oxidación y a su vez permite mejorar su estabilidad mecánica y química. Además de este proyecto se espera obtener la separación de compuestos polifenolicos derivados de los residuos acuosos durante el proceso de extracción del aceite, y encapsularlos en micro-nanocelulosas. MÉTODOS Búsqueda de compuestos derivados de las celulosas para la encapsulación de polifenoles comerciales como método de ensayo previo. Los componentes empleados han sido chitosán y carboximetilcelulosa. Se ha utilizado la técnica de gelificación iónica. RESULTADOS Los resultados obtenidos fueron partículas con forma esférica. CONCLUSIÓN En base a los resultados obtenidos, el método de síntesis seleccionado resulta adecuado para la obtención de las micropartículas. Siguiente paso del proyecto es incorporar los compuestos polifenolicos a la formúla y obtener la micro encapsulación de los mismos. Aplicación de la técnica de microencapsulación con los derivados de celulosa sacados del proceso de biorrefineri

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Modalidad: Póster

INTRODUCCION La Cohorte del Maule (MAUCO) es un estudio de cohorte que busca analizar la historia natural de las enfermedades crónicas en la comuna de Molina, Chile (40,000 habitantes), caracterizada por tener las tasas nacionales más altas de enfermedades cardiovasculares y diversos tipos de cáncer, y donde coexisten una mezcla factores de riesgo ambientales y sociales típicos de países subdesarrollados y desarrollados. OBJETIVOS El objetivo de MAUCO es evaluar la salud física y mental a nivel clínico y subclínico, junto a una amplia gama de exposiciones asociadas con salud y el envejecimiento saludable. En este trabajo se muestran los primeros resultados preliminares de la medición basal de la cohorte. METODOS Población y muestreo: Residentes de Molina de 38 a 74 años de edad. Instrumentos: cuestionario de salud y factor de riesgo validados para la población chilena, evaluación de la condición física, mediciones de la presión arterial, mediciones de la frecuencia cardíaca, pruebas cognitivas. Muestras de orina, saliva y sangre. Mediciones antropométricas, Análisis de bio-impedancia, Prueba de fuerza de agarre, Electrocardiograma, Ecografía hepatobiliar, Examen oral. A partir de la revisión de registros administrativos de consultas de urgencia y hospitalizaciones se identifican casos de enfermedad cardiovascular y cáncer principalmente. Se realiza seguimiento a los años 2, 5, 7 y 10. RESULTADOS PRELIMINARES Un total de 8176 participantes completaron su evaluación basal de salud con edad promedio de 53.5 años. La media de escolaridad fue de 8,8 años. De ellos, el 61.9% era empleado y el 48.6% de los participantes había sido trabajador agrícola. El 86,3% pertenecen al sistema de salud pública. Diferencias significativas entre mujeres y hombres para diabetes (16,6% vs 14,8%), hipertensión (47,1% vs 56,6%), enfermedad cardiovascular (7,0% vs 7,4%). Similares prevalencias se han observado en la subcohorte de trabajadores agrícolas, evidenciando un posible efecto de trabajador sano. Hasta la fecha, 82% de la población tiene su medición basal completa, mientras que de éstos, el 30% ya completó el año 2 de seguimiento. DISCUSIÓN El análisis basal y el seguimiento inicial confirman que esta es una población con alto riesgo de enfermedades crónicas. Esta cohorte es única dentro de las que existen en Chile, dado su tamaño, variedad de daños evaluados, su biobanco con estándares internacionales y por ser la única que realizó una medición basal de exposiciones a contaminantes ambientales.

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Modalidad: Póster

ABSTRACT Objectives: i) To analyse the association of body mass index (BMI) and some plasma tissue damage markers with postoperative pain; ii) To stablish a biochemical marker cut-off point able to predict major postoperative pain. Design: Cross-sectional study. Subjects: 96 adult male patients from Southern Spain (55±13 years old) who underwent an inguinal hernioplasty. Methods: Postoperative pain (8 hours after surgery) was assessed through a visual analogic scale. BMI was calculated and medication, alcohol consumption and smoking habit registered. Some plasma tissue damage markers like fibrinogen, lactate dehydrogenase (LDH), C-reactive protein, cortisol, creatine kinase and glutamic-pyruvic, glutamic oxaloacetic and gamma-glutamyltransferase transaminases were determined by standard procedures. Results: After adjusting for potential confounders, BMI was not associated with postoperative pain (p>0.05). Plasma fibrinogen was associated with greater postoperative pain (β=0.333, p<0.05). Plasma LDH concentration was strongly associated with greater postoperative pain (β=0.606, p<0.001). Alcohol consumption was also associated with higher postoperative pain (β=0.212, p<0.05). No associations were observed regarding age, tobacco and the rest of tissue damage biochemical markers studied. Plasma LDH concentration was able to discriminate between presence and absence of major postoperative pain (receiver operating characteristic area under the curve=0.655, p≤0.01). A LDH concentration >204 IU/L was associated to 3 times increased odd ratio of major postoperative pain. Conclusion: Contrary to expectations, greater BMI was not associated with higher postoperative pain. Notwithstanding, the assessment of plasma LDH might provide useful information to predict major postoperative pain, which can help to adjust analgesics, or other kind of pain relief.

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Modalidad: Oral

Introducción

La hidrosadenitis supurativa (HS) es una enfermedad autoinflamatoria crónica caracterizada por brotes de nódulos, abscesos y fístulas de predominio en áreas intertriginosas, que generan dolor, supuración, mal olor y prurito. Múltiples estudios revelan un gran impacto en la calidad de vida. Sin embargo, su impacto en la función sexual ha sido escasamente estudiado. Los objetivos de esta investigación son describir la frecuencia de disfunción sexual (DS) en las mujeres y de disfunción eréctil (DE) en los varones con HS, y explorar los factores clínicos y epidemiológicos potencialmente asociados.

Pacientes y métodos

Estudio transversal mediante un cuestionario online crowd-sourced en colaboración con la asociación española de enfermos de HS (ASENDHI) entre el 1 y el 31 de marzo de 2018. Se recogieron datos socio-demográficos, biométricos, uso de medicación para otras comorbilidades y diversas características de la enfermedad. La presencia de DS se evaluó mediante el cuestionario validado Female Sexual Function Index-6 (FSFI-6), y la de DE mediante el International Index of Erectile Function-5 (IIEF-5).

Resultados

En total, 393 participantes respondieron el cuestionario, 7 de forma incompleta. De los 386 participantes finales, el 79,27% (306) fueron mujeres. La edad media fue 37,81 (9,26) años. Presentaron DS el 51% (IC 95%: 45%-57%) de las mujeres y DE el 60% (IC 95%: 49%-70%) de los varones. Tras el análisis multivariante, los factores relacionados de forma estadísticamente significativa con DS en mujeres fueron el grado de actividad de la enfermedad, medido mediante la escala Patient’s Global Assessment, y las Numeric Rating Scale de supuración y mal olor; la presencia de pareja estable fue un importante factor protector. Por su parte, tras el análisis ajustado, se encontró asociación estadísticamente significativa entre DE y la edad; la presencia de pareja estable nuevamente fue un factor protector.

Conclusiones

Presentamos el estudio con mayor tamaño muestral hasta la fecha sobre sobre disfunción sexual en HS. Existe un importante impacto en la salud sexual de los pacientes con HS, con una alta prevalencia de DS y DE. Los resultados sugieren que la DS en pacientes con HS se debe, al menos en parte, a la actividad de la enfermedad y los síntomas, y resaltan la importancia de un tratamiento adecuado para mejorar su función sexual. La presencia de pareja estable se ha mostrado como un importante factor protector.

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Modalidad: Póster

La hipertensión abdominal se define como una medida de la presión intraabdominal elevada y el síndrome compartimental abdominal cuando se asocia a disfunciones orgánicas. El tratamiento quirúrgico en estos casos realizándose una laparotomía descompresiva esta indicada para mejorar el estado hemodinámico Presentar un caso de síndrome compartimental abdominal y ver las indicaciones de tratamiento con laparotomía descompresiva . Paciente mujer de 76 años con antecedentes personales de HTA, DM tipo II, IVC, gonartrosis e intervenida de hernia discal remitida por el DCCU por dolor intenso lumbar de instauración brusca e inestabilidad hemodinámica con taquipnea e hipotensión. En la exploración abdomen doloroso a la palpación, levemente distendido con peritonismo. Se realiza angioTAC donde se evidencia aneurisma de aorta abdominal infrarrenal roto. Es intervenida colocándose endoprótesis y realizándose by-pass femoro-femoral. El postoperatorio cursa con mala evolución por lo que se interviene a las 24 horas por fuga periprótesis. Continua con mala evolución con mal estado general, oliguria con vasoactivos a altas dosis y PIA 22 cmH2O2. Es diagnosticada de síndrome compartimental abdominal por lo que se realiza laparotomía descompresiva. El postoperatorio cursa con mejoría progresiva de la paciente siendo dada de alta a los 15 días del ingreso. La hipertensión abdominal se define como una medida de la presión intraabdominal elevada y el síndrome compartimental abdominal cuando se asocia a disfunciones orgánicas. La cavidad abdominal y el retroperitoneo se comportan como compartimentos estancos por lo que cambios en el volumen de su contenido producen cambios en la presión intraabdominal. El aumento de la misma de forma mantenida tiene repercusiones sobre diferentes sistemas provocando una disminución del flujo sanguíneo a los órganos abdominales y las mucosas de los mismos . Provoca igualmente un aumento de la compresión venosa mesentérica que aumenta el CO2, aumento de la permeabilidad de la mucosa y translocación bacteriana. Todo ello desemboca en un fallo multiorgánico. Para evitarlo contamos con medidas terapeúticas encaminadas a disminuir los efectos de la presión intraabdominal como mantener una adecuada PPA mayor de 50 mmHg, tratar los defectos de la coagulación y mejorar la función respiratoria. En cuanto a la descompresión quirúrgica numerosos estudios señalan que es necesario cuando la PIA es mayor de 35 mmHg o mayor de 26mmHg con disfunción orgánica o isquemia o con presiones entre 26 y 35 mmHg que con tratamiento médico no mejoran. Tras la descomprensión suelen disminuir las cifras de PIA y mejoran las alteraciones fisiopatológicas con una recuperación de las disfunciones orgánicas variables. La supervivencia tras la descompresión se situa entre el 38 y el 71% destacando una mayor supervivencia cuanto más precozmente se realice. El diagnostico precoz de la HPA asi como del SCA es fundamental para la realización de un tratamiento adecuado .

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Modalidad: Póster

INTRODUCCIÓN: Los Cuidados Paliativos (CCPP) se definen por la Organización Mundial de la Salud (OMS) como un enfoque que mejora la calidad de vida de pacientes y familias que se enfrentan a enfermedades potencialmente mortales mediante la prevención y el alivio del sufrimiento. En España los CCPP tienen una trayectoria relativamente corta y a pesar de las estrategias gubernamentales, no se ha conseguido ofrecer atención paliativa generalizada a los pacientes crónicos complejos (PCC) debido a dificultades en la detección de las necesidades paliativas. Los PCC presentan enfermedades crónicas con disfunción de órganos o sistemas, o enfermedades oncológicas, junto con criterios de complejidad sanitaria y social. La atención a estos pacientes se caracteriza por la dificultad en su gestión y por la necesidad de aplicarles planes individuales específicos de acuerdo a sus necesidades. Presumiblemente muchos de los PCC presentarán necesidades paliativas, evolucionando la situación a Paciente Crónico Avanzado (PCA) y, según el pronóstico, a Situación de Enfermedad Terminal (SET), requiriendo cada etapa una atención distinta e individualizada.

JUSTIFICACIÓN: Existe un gran consenso en la literatura sobre los beneficios que conlleva una identificación precoz de los PCC y PCA. Se ha comprobado que, con una valoración estandarizada de las necesidades paliativas, que los PCC y PCA reciben unos cuidados más individualizados y acceden a los recursos de manera más adecuada. En Andalucía no existe esta valoración estandarizada y esto provoca que muchos de los pacientes en esta situación se encuentren infradiagnosticados y no reciban los cuidados adecuados. Por lo tanto, una valoración como la que se propone en este estudio, permitirá a los profesionales identificar la situación en la que se encuentran, y movilizar los recursos de cuidados paliativos más adecuados para cada paciente.

OBJETIVOS: Identificar las necesidades paliativas, la fragilidad, la complejidad del caso y la complejidad paliativa de PCC en distintos contextos clínicos en Andalucía, así como estimar los PCC que han sido derivados a los recursos necesarios en un año. Secundariamente, comprobar la capacidad pronóstica y la utilidad clínica de los diferentes instrumentos de valoración para el desarrollo de estrategias relacionadas con los cuidados del PCC.

METODOLOGÍA: Se plantea un estudio observacional de cohortes multicéntrico en el que se realizará al menos a 420 PCC una valoración inicial y un seguimiento a los 6 y 12 meses de las necesidades paliativas mediante la herramienta NECPAL-ICO-CCOMS©3.1, de la complejidad del caso y de la paliativa mediante el IDC-PAL, del pronóstico mediante PPI, PPS y PROFUND. Las variables de resultado se medirán mediante indicadores específicos para obtener los porcentajes de recursos utilizados durante el periodo de seguimiento.

Este estudio cuenta con el informe favorable del Comité de ética e investigación provincial.

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Modalidad: Oral

INTRODUCCIÓN NZ es un programa de intervención simultánea entre las UCIs españolas. Consta de un paquete de medidas preventivas.Con este programa, se pretenden reducir a menos de 9 episodios por 1.000 días de ventilación mecánica (dMV). Un grupo de expertos creó una lista de 7 recomendaciones obligatoria y 3 medidas adicionales muy recomendables. OBJETIVOS: Mostrar cómo NZ ha sido implementada en nuestra UCI. Evaluar la validez de las recomendaciones. MATERIAL Y MÉTODOS: - Estudio retrospectivo. 01.04.2011 / 31.12.2015. La fecha límite para la recogida de datos es en 2015 debido a un cambio en la gestión sanitaria granadina donde se fusionaron 2 hospitales, unificando las UCIs. - Campaña educativa con personal de UCI y Anestesiología y Reanimación (120 personas). Entrenando “onlineª través del módulo de capacitación del Ministerio de Salud con una duración de 10 horas, curso presencial (2 horas) y prácticas de 7 horas en turnos de trabajo. Evaluación ºn lineçon un diploma emitido por el Ministerio de Salud. - Colaboración con Servicio de Farmacia para preparar solución oral de clorhexidina (2%) para la limpieza oral, solicitamos tubos de la traqueotomía y las cánulas con aspiración subglótica. - Intervención normalizada mediante la aplicación de un conjunto de medidas básicas de cumplimiento obligatorio y otra de medidas específicas (altamente recomendadas) denominadas STOP VAP. Medidas obligatorias: formación adecuada en el manejo de vías respiratorias, control de la presión del neumotaponamiento (> 20 cmH2O), higiene bucal cada 6-8 horas, evitar, cuando sea posible, la posición supina a 0 ^∘, reducir la intubación y / o su duración, evitar el cambio programado de tubos, humidificadores y tubos traqueales. Medida altamente recomendada: aspiración intermitente de secreciones subglóticas - Sesión mensual de evaluación de los resultados y refuerzo de las medidas adoptadas para reducir la incidencia de NAVM. RESULTADOS: El colectivo que obtuvo mejor nota en la evaluación fue el de médicos especialistas con un 26.13 de nota media sobre 30, seguidos por enfermería. Aceptación del programa por el 100% del personal. Evolución tasas NAVM por 1000 dVM: Campaña educacional (01.04.11- 01.06.11): 14.02/ dVM. España 8.48 dVM. 01.06.11 - 01.04.12: 7,28 / dMV. España 7,91 / dMV. 01.04.12-01.04.13: 3.26 / dMV. España 5,59 / dMV. 01.04.13-01.04.14: 6.11 / dMV. España 5.17 / dMV. 01.04.14-01.04.15: 2.71 / dMV. España 5,92 / pMV. DISCUSIÓN Los datos son muy positivos y estimulantes, se ha logrado gracias a los esfuerzos del personal que ha logrado estandarizar y hacer rutinarias las recomendaciones. El aumento de 2013-2014, puede deberse a una caída significativa en el programa de higiene de manos desde la introducción de una nueva solución alcohólica que irritativa. Fue retirada más tarde volviendo a mejorar la tolerancia. Con esto demostramos que la NAVM puede ser drásticamente reducida con STOP NAMV.

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Modalidad: Póster

INTRODUCCIÓN: En torno al 90% de la población española mayor de 35 años presenta enfermedad periodontal. Afecta a los tejidos de soporte de los dientes, desde la gingivitis hasta su extensión hacia el ligamento periodontal y el hueso adyacente, dando lugar a la aparición de bolsas periodontales y provocando una perdida ósea y de inserción progresiva. Se caracteriza por la presencia de defectos llamados "black holes".

MÉTODOS: Estudio controlado doble ciego en colaboración con la Universidad de Granada y la Clínica Dental de la Doctora E.S.F. tratando 23 pacientes con un producto compuesto por HA y EGF de Inves Biofarm aplicado por electroporación. Duración: 6 meses. Los pacientes entre 18 y 60 años fueron divididos en 2 grupos 1 y 0 de forma aleatoria. El grupo 1 tratado con un gel de HA 1% y el grupo 0 con una emulsión de HA 1% -EGF. Tratamiento de 10 sesiones: 1 sesión cada semana durante 4 semanas, 1 cada 2 semanas durante 2 meses y 1 sesión cada mes durante 2 meses. Se midieron Profundidad de sondaje (PD), pérdida ósea (ACL) con radiografía y pérdida de inserción clínica (CAL).

RESULTADOS Y DISCUSIONES: Los pacientes tenían entre 3 y 5 defectos periodontales. El tamaño de la muestra del grupo 0 fue de 41 agujeros negros analizados y 50 para el grupo 1. Se calcularon las diferencias de medias de las muestras de pares para las variables de resultados (PD), (ACL) y (CAL). Se consideraron las diferencias entre los datos iniciales y los datos de 3 meses (llamado I-3P), entre los datos iniciales y los datos de 6 meses (llamado I-6P) y entre los datos de 3 meses y los datos de 6 meses (llamado I-36P). Después de 6 meses, la disminución fue mayor en ambos grupos que después de 3 meses. La disminución de la media de PD (mm) indica la regeneración del periodonto. Hubo disminución de la PD después de ambos tratamientos. Después de 6 meses, la medida de ACL, que indica la regeneración del tejido óseo por lo cual su mejoría se mide con el aumento del área fue más alta que los datos iniciales en ambos tratamientos. La pérdida de inserción clínica (CAL) es el área de los agujeros negros. La regeneración del tejido gingival se calcula con la disminución de CAL. Ambos grupos disminuyen el área de los agujeros negros

CONCLUSIÓN: Ambos tratamientos, 1% de emulsión HA-EGF y 1% de gel HA aumentan el tejido gingival y óseo.

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Modalidad: Póster

Introducción

La aterosclerosis se asocia con factores de riesgo ya desde la infancia, aunque los síntomas puedan aparecer mucho más tarde. La proteína C-reactiva (PCR) representa el biomarcador inflamatorio más común y está asociado con adiposidad y marcadores de riesgo desde la infancia. Parece ser que la CRP también está asociada con la resistencia a la insulina incluso en edades tempranas. Por ello, el objetivo de este estudio es valorar la asociación entre la PCR y la resistencia a la insulina en niños Europeos.

Métodos

2913 niños del estudio IDEFICS se incluyeron en los análisis (1509 niños y 1404 niñas) con edades comprendidas entre 2 y 10 años. Se midieron una serie de variables bioquímicas, entre ellas se valoró la insulina y la glucosa, a partir de la cual se calculó HOMA. La PCR fue categorizada en tres grupos debido a que muchos sujetos estaban en el límite de detección 0.02 mg/dL. Se realizó análisis de ANCOVA para valorar las medias de HOMA según categoría de CRP, usando el BMI y el sexo como covariable.

Resultados

Se encontraron diferencias significativas (p menor de 0.001) entre las medias de insulina y los grupos de CRP, siendo las medias mayores cuanto mayor es la concentración de la CRP en el grupo total de niños participantes. Media y desviación estándar de HOMA para cada categoría: CRP I, 0,86 ± 0,65; CRP II, 0,91 ± 0,71 y CRP III, 1,05 ± 1,18. En cuanto a las diferencias por edades, las diferencias fueron las mismas tanto en el grupo de 2-6 años (p=0.031) como en el grupo de 6-10 años (P menor de 0.001).

Conclusión

Estos resultados sugieren que aquellos niños que presentan CRP elevada tienen, a su vez, un HOMA elevado ya desde edades tempranas. Esto puede ser debido a que ambas condiciones comparten marcadores de riesgos cardio-metabólicos. Por ello la disminución y/o prevención de los factores de riesgo en la infancia es un factor clave para evitar el desarrollo de enfermedades cardiovasculares futuras.

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Modalidad: Póster

Introduccion 5 millones de niños al año son sometidos a procedimientos quirúrgicos y casi el 75% experimenta ansiedad preoperatoria [1]. Esto puede generar dolor moderado-intenso en el postoperatorio [2], aumento de la estancia hospitalaria, retrasos al ingresar en el quirófano y menor cooperación del paciente.

Objetivo El propósito de esta revisión es evaluar la eficacia de las diferentes intervenciones realizadas para disminuir la ansiedad en población infantil antes de un proceso quirúrgico.

Metodologia El diseño es una revisión sistemática de ensayos clínicos aleatorizados entre los años 2013 y 2018 en las bases de datos bibliográficas Pubmed, ScienceDirect y Google Scholar utilizando las palabras clave “preoperative” AND “children” AND ”anxiety” AND “interventions”. La escala metodologica JADAD fue empleada para valorar la validez de los estudios.

Resultados Trescientos cincuenta y un estudios han sido analizados. De estos solo 7 fueron seleccionados para su revisión. En la Tabla 1 se muestran los resultados obtenidos. La aplicacion de un programa preoperatorio reduce significativamente la ansiedad en poblacion infantil. La intervención aplicada por Gao 2014 [3] durante la inducción de la anesthesia produjo la major reducción de la ansiedad frente al cuidado estandar.

Conclusion La aplicación de una intervención produce la reduccion significativa de la ansiedad durante el preoperatorio de los niños sometidos a cirugía.

[1] Perry JN, Hooper V, Masiongale J. Reduction of preoperative anxiety in pediatric surgery patients using age-appropriate teaching interventions. Journal of Perianesthesia Nursing. 2012; 27: 69-81. doi:10.1016/j.jopan.2012.01.003

[2] Caumo W, Broenstrub JC, Fialho L, Petry SMG, Brathwat O, Bandeira D, et al. Risk factors for postoperative anxiety in children. Acta Anaesthesiologica Scandinavica. 2000; 44: 782-789.

[3] Xing Lian G, Ying L, Shi T, Dong Quing Z. Effect of interesting games on relief of preoperative anxiety in preschool children. International Journal of Nursing Sciences. 2014; 1 (1): 89-92. https://doi.org/10.1016/j.ijnss.2014.02.002

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Modalidad: Póster

Background: Until now, there isn’t a biological sample that fully characterize the exposure to endocrine disrupting chemicals (EDCs) in humans, such as parabens (PBs) and benzophenones (BPs). These chemicals have been used as conservatives and UV-filters in personal care products and food packaging. Therefore, it is necessary to explore different biological matrices that could offer additional information to the most standardized ones (urine and/or peripheral blood). In this regard, menstrual blood might be a useful non-invasive matrix to evaluate the exposure to PBs and BPs in women on reproductive age. Aim: To evaluate the levels of PBs and BPs in menstrual blood, and to identify some socio-demographic, dietary and cosmetic predictors of exposure, in order to explore the biological meaning of menstrual blood as a biomarker of exposure to PBs and BPs. Material & Methods: We determined the concentration of 4 PB congeners [methyl- (MeP), ethyl- (EtP), propyl- (PrP) and butyl-paraben (BuP)] and 6 BP congeners [BP-1, BP-2, BP-3, BP-6, BP-8 and OH-BP-4] in menstrual blood samples from 57 healthy Spanish women on reproductive age. Socio-demographic information, as well as dietary habits and cosmetic use was gathered through an electronic questionnaire that participants filled via internet. Spearman correlations tests were performed, followed by stepwise multivariable linear regression analyses to assess determinants of the exposure. Results: Detection frequencies of PBs and BPs ranged from 0.0% to 98.2%. All analysed samples were positive for ≥3 of the selected xenobiotics, and the majority of samples (n=45, 78.9%) were positive for ≥6 compounds. MeP and BP-3 were the most frequently detected compounds, with a median concentration of 1.41 and 1.70 ng/mL of menstrual blood, respectively. Age was inversely associated with MeP levels. Regarding dietary habits positive associations were detected between fish consumption and both MeP and BP-6, meat consumption and BP-3, cold meat consumption and BP-1, bread consumption and both BP-1 and OH-BP-4, fruit consumption and EtP and organic food and OH-BP-4. Contrary, an inverse association was found between pasta consumption and EtP, dairy products and BP-6 and pulse consumption and BP-1. Finally, the use of dermal oil and creams were positively associated with BP-3 levels. Conclusions: This study reveals for the first time the presence of numerous PBs and BPs in menstrual blood from Spanish women on reproductive age, and the contribution of several dietary and cosmetic patterns to this exposure. These results also shed some light on the information offered by the menstrual blood as a potential biomarker to characterize the exposure to PBs and BPs.

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Modalidad: Póster

Introducción: En Europa, un 8% de los recién nacidos (RN) presentan bajo peso al nacer, necesitando de cuidados intensivos neonatales (UCIN) por la inmadurez y deficiencias que presentan. En la UCIN están en contacto diario con una amplia variedad de productos en cuya formulación han podido utilizarse compuestos químicos con actividad hormonal [disruptores endocrinos (DEs)].

Objetivo: Identificar fuentes de exposición a DEs en la UCIN, analizar la exposición a DEs específicos (Bisfenol A-BPA y Parabenes-PBs), y analizar la actividad hormonal de: (1) algunos dispositivos plásticos, (2) textiles y (3) productos de cuidado personal de uso rutinario en las UCIN.

Material y Métodos: Se han testado un total de 23 productos plásticos, 19 productos textiles y 9 cosméticos. Estos materiales se someten a extracción química con tetrahidrofurano, acetato de etilo y/o metanol y los compuestos químicos extraídos se identifican y cuantifican mediante UHPLC-MS/MS. La actividad estrogénica de los extractos son testadas en bioensayos específicos de estrogenicidad (E-SCREEN) y anti-androgenicidad (A-SCREEN).

Resultados: Se han encontrado altas concentraciones de BPA en alguno de los materiales plásticos analizados (llave de tres pasos, 7958.7 ng/g; sonda de alimentación enteral, 329.2ng/g), y menores en otros (catéter umbilical venoso, tubo endotraqueal, alargadera del sistema de infusión intravenoso, guantes estériles, >100 ng/g). En los textiles analizados también se han encontrado concentraciones de BPA (esparadrapo con impresiones gráficas, >600 ng/g); además de MeP (200.9 ng/g). La tetina del chupete (2403.8 E2Eq/g), el esparadrapo con impresiones gráficas (2107.4 E2Eq/g), el sensor del pulsómetro (1400.0 E2Eq/g) y la llave de tres pasos (500 E2Eq/g), son los que presentaron mayor actividad en el ensayo E-Screen; mientras que la tetina del chupete (9,8 ProcEq/g), la llave de tres pasos (5.4 ProcEq/g) y los guantes estériles, la sonda de alimentación enteral y el esparadrapo con impresiones gráficas (>1 ProcEq/g), los activos en el ensayo de anti-androgenicidad.

Conclusión: Las UCIN son una fuente importante de exposición a DEs, que podría tener consecuencias adversas en salud de los RN hospitalizados en ellas.

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Modalidad: Póster

Introducción: El periodo de la adolescencia es fundamental para afianzar la Imagen Corporal (IC). Por ello, se precisa detectar posibles inquietudes respecto al físico para evitar trastornos alimenticios en este periodo. De ahí, que el objetivo del estudio sea determinar la imagen corporal del alumnado de 3^o y 4^o de ESO y su relación con el IMC y el perímetro de cintura (PC).

Metodología: Estudio descriptivo transversal donde participaron 97 estudiantes (51 chicos y 46 chicas) entre 15 y 17 años. Para determinar la IC se utilizó el test de las nueve siluetas, clasificándolas por categorías en función de la diferencia entre el IMC real y el IMC percibido o deseado. Para conocer el estado nutricional se midió el peso y la altura, obteniéndose el IMC y el PC.

Resultados: Los adolescentes presentan un IMC y un PC medio (21,58 kg/m2 ±4,4 y 73,09cm ±11,02, respectivamente). El 14,8% se ve mas gruesos que lo que realmente están y el 56,7% se perciben como realmente son. Un 35,1% están satisfechos con su silueta, mientras que al 44,3% le gustaría estar más delgado (39% chicos y 50% chicas). Existió correlación entre la silueta percibida y deseada con el IMC y el perímetro de cintura (p<0,01).

Conclusiones: Más del la mitad de los estudiantes de 3^o y 4^o de ESO se perciben en general, como realmente son, existiendo no obstante, un porcentaje elevado de insatisfación con su imagen corporal, detectándose adolescentes que se ven más gruesos de lo que realmente son y desearían perder peso, siendo mayor en chicas que en chicos. El IMC y el PC se encuentran dentro de los valores referenciales. Se aconseja que las clases de educación física sirvan como contenido para detectar posibles casos de trastornos de la imagen corporal ya que podrían ser un buen medio para que los hábitos saludables se optimicen y consoliden. En fturas investigaciones se debería la muestra de estudio.

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Modalidad: Póster

The role of fungi in the environment is of paramount importance. Some of them can be of great biotechnology interest. However, prior to their use as biotechnological tools any potential threat to human, animal or plant health should be ruled out.

Based on a previous biosafety test developed for bacteria in our group we have developed a Fungal Environmental and Human Safety Index (FEHSI). To provide an easy-to use and cheap method to replace the use of vertebrate animals, we propose a panel of tests and an evaluation system to reliably determine the biosafety of fungi strains used as biotechnological tools. Based on the results of different tests, we propose a scoring system to evaluate the safety of isolated fungi strains.

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Modalidad: Póster

El cáncer colorrectal es el cáncer más frecuente en España, con 37,172 casos nuevos en el año 2018. Las características del tumor, la salud general del paciente, y las comorbilidades pueden influir en el tratamiento del cáncer y en su pronóstico.

Numerosos estudios han analizado la influencia de las comorbilidades sobre los resultados en salud, pero hay información limitada sobre la frecuencia y distribución de las comorbilidades en pacientes con cáncer colorrectal, particularmente en ancianos, en la población española.

Se ha desarrollado un estudio de cohortes de alta resolución y base poblacional con todos los casos de cáncer colorrectal diagnosticados por primera vez durante 2011 en dos registros poblacionales de cáncer de españoles (Granada y Girona), para describir la frecuencia y distribución de las comorbilidades, según características del paciente (edad, sexo, calidad de vida, hábito tabáquico, e Índice de Masa Corporal), del tumor (localización anatómica, grado de diagnóstico y estadio), y de la atención sanitaria recibida (tipo de admisión hospitalaria, cirugía y tiempo transcurrido desde el diagnóstico hasta la cirugía).

Se han caracterizado los factores de riesgo asociados a las comorbilidades más prevalentes en los pacientes, incluyendo demencia y multimorbilidad (la presencia de dos o más comorbilidades).

Las comorbilidades más frecuentes fueron diabetes (23.6%), enfermedad pulmonar obstructiva crónica (17.2%) e insuficiencia cardíaca congestiva (14.5%).

Se observó un patrón particular en el caso de la demencia, que fue la comorbilidad más frecuente en pacientes con 75 años o más. Los pacientes con demencia tuvieron una prevalencia 30% mayor de ser diagnosticados en estadio IV, la mayor prevalencia de admisión hospitalaria por emergencia (33%), y era casi 3 veces más probable que no se les practicase ningún tratamiento quirúrgico.

Los factores asociados con un riesgo más alto de multimorbilidad fueron: 1) edad de 75 años o más; 2) obesidad; 3) sexo masculino; 4) ser fumador actualmente; 5) recibir cirugía más de 60 días después del diagnóstico; 6) no recibir cirugía.

Los pacientes con multimorbilidad de 75 años o más mostraron una mayor prevalencia de admisión hospitalaria de emergencia seguida por cirugía el mismo día de la admisión (37%).

La alta frecuencia de diagnóstico en estadio avanzado (estadio IV) entre pacientes con demencia, así como la alta proporción de pacientes ancianos que no reciben cirugía, son hallazgos significativos que pueden requerir medidas de acción.

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Modalidad: Póster

Introducción Los programas de automanejo fueron diseñados para ayudar a los enfermos crónicos a mejorar y facilitar el manejo de su enfermedad. De esta manera, los pacientes son capaces de adquirir las capacidades necesarias para cuidarse, sin necesidad de realizar un excesivo consumo del sistema sanitario. El automanejo ha sido utilizado en numerosas patologías crónicas como la artritis y la diabetes dando resultados positivos. Sin embargo, en una patología tan prevalente como es el dolor cervical crónico aún no ha sido llevado a cabo.

Objetivo El objetivo de este estudio fue evaluar la efectividad de un programa de automanejo individualizado sobre la discapacidad y el estado percibido de salud en pacientes con dolor crónico cervical

Metodología En este estudio randomizado los pacientes fueron divididos en dos grupos, un grupo experimental que recibió un tratamiento de 4 semanas de fisioterapia y automanejo y un grupo control. Se utilizó el Neck Disability Index para valorar la discapacidad, y la escala visual analógica del EuroQol 5D para evaluar el estado percibido de salud.

Resultados Finalmente participaron un total de 52 pacientes. Tras las 4 semanas, el grupo experimental obtuvo mejoras significativas en la discapacidad así como en el estado general de salud (ambas p<0.01) comparado con el grupo control.

Conclusión Nuestros resultados muestran que un programa individualizado de automanejo mejora la discapacidad así como el estado percibido de salud en pacientes con dolor cervical crónico.

Palabras clave Self-management, neck pain, disease management

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Modalidad: Póster

Los productos cosméticos constituyen una categoría de productos de especial consideración puesto que pueden poseer propiedades terapéuticas. Esto hace que sea necesario diferenciarlos perfectamente del medicamento para situarlos en su marco regulador correspondiente para lo cual existen guías elaboradas por la propia Comisión Europea. El carácter sanitario de los cosméticos implica la existencia de una regulación por parte de las autoridades que en este caso se desarrolla con el Reglamento Europeo 1223/2009. Dentro del repertorio de ingredientes cosméticos diferenciamos entre los ingredientes macroscópicos y los nanomateriales. Estos últimos son definidos por la normativa de cosméticos como “Material insoluble o biopersistente fabricado intencionalmente que presenta una o más dimensiones externas o una estructura interna del orden de 1 a 100 nm” y estos materiales se adaptan a unos de requisitos de seguridad específicos. En este trabajo se ha analizado la regulación de los productos cosméticos en Europa y España, las guías de evaluación y opiniones elaboradas por los comités técnicos de la Comisión Europea como son el SCCS, JRC destinados a la evaluación de los nanomateriales como ingredientes de productos cosméticos centrándose en sus requisitos de seguridad, así como otros documentos de interés aportados por organizaciones internacionales como son la OECD y la Organización Mundial de la Salud. Los nanomateriales han comenzado a aplicarse en los productos cosméticos con antelación a otros sectores como es el del medicamento. Esto se debe a que los requisitos de los productos cosméticos son mucho más laxos puesto que no requieren una autorización para su fabricación ni para su comercialización. Los cosméticos están sometidos a un régimen de notificación y aquellos que presenten nanomateriales en su formulación tienen requisitos de notificación adicionales. Las nanopartículas de ZnO y TiO2 empleadas como filtro UV han demostrado tener una mayor capacidad de atravesar las capas superficiales de la piel cuando esta ha sido dañada por la radiación ultravioleta B. Hace falta aclarar que requisitos son exigidos a los nuevos materiales empleados en productos cosméticos. Esto es labor del SCCS mediante la publicación de las correspondientes guías de requisitos de seguridad. La guía actual no aporta suficientes alternativas a estos ensayos y es necesaria una actualización que incorpore los nuevos avances en técnicas in vitro. Como conclusión podemos decir que hace falta crear nanomateriales estandarizados que sirvan de referencia a la hora de analizar las propiedades fisicoquímicas del nanomaterial y de realizar los ensayos toxicológicos así como que se hace patente la necesidad de actualizar los parámetros toxicológicos empleados para la evaluación del riesgo de cualquier ingrediente cosmético pues estos son obtenidos a partir de ensayos in vivo cuya realización está prohibida para la evaluación de ingredientes cosméticos.

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Modalidad: Oral

Introduction

Quantifying the cervical mechanical functionality is a promising diagnostic tool of preterm birth. It is based on the hypothesis that collagen remodelling during cervical ripening ultimately controls the mechanical ability to dilate [1-4]. Torsional wave elastography is proposed as a technology suited to measure cervical specific geometry, given that shear elastic waves propagate through soft tissue radially and in depth in a cylindrical geometry. Here, a torsion ultrasound transducer is tested on pregnant women to quantify shear stiffness changes on the cervix related to gestational age.

Material and methods

A clinical pilot trial has been carried out in a total of 42 women at 16-41 weeks of gestation. The study was conducted in University Hospital San Cecilio in Granada (ES). Correlation between cervical stiffness score by torsional waves and gestational age was calculated by the ROC curve. Cronbach’s alpha coefficient was carried out to assess the concordance between inter/intra-operator collecting measurements. Maternal and fetal adverse events potentially related to torsional waves, in particular damage on sensitive organs, were audited [5].

Results

Statistically significant correlation between cervical stiffness and gestational age was found. Cervical measurements taken by the same and by two different observers were reliable and reproducible. 

Discussion

It is feasible to quantify changes of cervical stiffness correlated to gestational age [6]. Torsional waves elastography technique is a valuable tool to provide additional information on the process of cervical effacement to that obtained from Bishop’s test and cervical length by conventional ultrasound. A larger study is scheduled to assess the validity of the technique in prediction of preterm birth and success in labor induction.

References

1. Lindsey C. Carlson, Helen Feltovich, Mark L. Palmeri, Jeremy J. Dahl, Alejandro Munoz del Rio, and Timothy J. Hall. Shear wave speed estimation in the human uterine cervix. Ultrasound Obstet Gynecol, 43:452-458, 2014. 2. Kristin M. Myers, Helen Feltovich, Edoardo Mazza, Joy Vink, Michael Bajka, Ronald J. Wapner, Timothy J. Hall, and Michael House. The mechanical role of the cervix in pregnancy. J. Biomechanics, 48:1511-1523, 2013. 3. K.M. Myers, A.P. Paskaleva, M. House, and S. Socrate. Mechanical and biochemical properties of human cervical tissue. Acta Biomaterialia, 4(1):104-116, 2008. 4. A. Fruscalzo, A. P. Londero, C. Fröhlich, U. Möllmann, and R. Schmitz. Quantitative elastography for cervical stiffness assessment during pregnancy. BioMed Research International, 2014 5. P Massó, G Rus, and FS Molina. On the safety of elastography in fetal medicine: A preliminary study of hypoacusia. Ultrasound Obstet Gynecol, 2017. 6. J. Melchor and G. Rus. Torsional ultrasonic transducer computational design optimization. Ultrasonics, 54(7):1950-1962, 2014.

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Modalidad: Oral

Los disruptores endocrinos son sustancias químicas capaces de interferir en el normal funcionamiento del sistema hormonal. El Bisfenol A (BPA) es un disruptor endocrino y está presente en numerosos productos de uso cotidiano. EPIC (European Prospective Investigation into Cancer and Nutrition) es un estudio multicéntrico de cohortes prospectivo que realizó el reclutamiento de 41.000 sujetos en España entre 1992 y 1996.

El objetivo del estudio fue determinar la exposición a BPA a través de sus niveles en muestras de suero del reclutamiento de una subcohorte de EPIC-España y estudiar los factores asociados a dicha exposición.

Se seleccionó una subcohorte de 3.553 sujetos de 4 centros EPIC-España (Gipuzkoa, Granada, Murcia y Navarra) que no auto-reportaran enfermedades crónicas y que proporcionaron muestra de sangre. Se recogió información de la dieta en el último año, mediante entrevista personal con un cuestionario validado de 662 alimentos, medidas antropométricas y variables de estilos de vida.

Los niveles de BPA se midieron en las muestras de suero mediante UHPLC-MS/MS (límite de detección 0,2 ng/ml). Se calcularon medias geométricas e intervalos de confianza (IC) según los factores analizados y se contrastaron las diferencias mediante el test de Kruskal-Wallis. Se usó regresión Tobit multivariante con efecto aleatorio a nivel de provincia sobre los niveles de BPA (ln-transformados), con cada uno de los 17 grupos de alimentos principales (log2-transformados), ajustando por otros factores asociados.

La edad media de los participantes fue 53 años (rango 30-69), y el 49% eran hombres. De las 3.553 muestras analizadas, el 70% tuvo valores detectables de BPA, con media geométrica 1,19 ng/ml (IC 95%: 1,12-1,25). Se observaron diferencias significativas según provincia, con los valores más altos en Granada (1,83 ng/ml) y los más bajos en Gipuzkoa (0,67 ng/ml). Por sexo los porcentajes de detección de BPA fueron similares (p=0,56) pero con concentraciones superiores en los hombres (1,27 vs 1,11 ng/ml; p=0,01). Se observó una forma de V invertida entre la edad y las concentraciones de BPA, con valores más altos en el grupo de edad central (45-54 años con 1,31 ng/ml). No se observaron diferencias en relación al IMC, nivel educativo y el estatus de fumador o bebedor. En base a los modelos de regresión ajustados por sexo y edad y controlando por provincia, duplicar el consumo de bebidas alcohólicas se asociaba con un 6,5% de aumento de los niveles de BPA (IC95%: 1,5% ; 11,8%). Por el contrario, un mayor consumo de grasas estuvo asociado a un 16% menos niveles de BPA en sangre (IC95%: -27,2%; -2,6%).

La exposición a BPA varió según la provincia de residencia, el sexo y la edad, pero no por las características antropométricas o de estilos de vida. En relación a la dieta sólo el consumo de alcohol y grasas mostraron asociación con los niveles de BPA en sangre.

Financiación: ISCIII Exp PI14/00067, PI14/01716, PI14/01880, PI14/00556, Fondos FEDER, AECC

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Modalidad: Póster

Bisphenol A (BPA) is a high-production-volume chemical with endocrine disrupting properties commonly used as color developer in thermal paper. Concerns about the potential hazards of human BPA exposure have led to the increasing utilization of alternatives such as bisphenol S (BPS) and bisphenol F (BPF).

This study was designed to assess: (i) BPA, BPS, and BPF concentrations in 112 thermal paper receipts from Brazil, France, and Spain by liquid chromatography coupled to mass spectrometry (LC-MS); and (ii) hormone-like activities of these receipts using two receptor-specific bioassays, the E-Screen for (anti-)estrogenicity and PALM luciferase assay for (anti-)androgenicity.

BPA was present in 95.3% of receipts from Spain, 90.9% of those from Brazil, and 51.1% of those from France at concentrations up to 20.27 mg/g of paper. Only two samples from Brazil, two from Spain, and ten from France had a BPS concentration ranging from 6.46 to 13.29 mg/g; no BPA or BPS was detected in 27.7% of French samples. No BPF was detected in any receipt. Estrogenic activity was observed in all samples from Brazil and Spain and in 74.5% of those from France. Anti-androgenic activity was observed in>90% of samples from Brazil and Spain and in 53.2% of those from France. Only 25.5% of French samples were negative for both estrogenic and anti-androgenic activity. Estrogenic and anti-androgenic activities per gram of paper were up to 1.411 μM estradiol (E2) equivalent units (E2eq) and up to 359.5mM procymidone equivalent units (Proceq), respectively. BPA but not BPS concentrations were positively correlated with both estrogenic and antiandrogenic activities. BPA still dominates the thermal paper market in Brazil and Spain, and BPS appears to be one of the main alternatives in France.

There is an urgent need to evaluate the safety of alternatives proposed to replace BPA as developer in thermal printing. The large proportion of samples with hormonal activity calls for the adoption of preventive measures.

I Congreso de Investigadores del PTS. Granada 13-15 Feb. 2019

Modalidad: Póster

La prevalencia de los trastornos del habla en pacientes con Enfermedad de Parkinson (EP) es de entre el 60-80%. La intervención logopédica es una de las opciones elegidas para su tratamiento. El objetivo de esta investigación fue revisar la efectividad de la terapia logopédica en los trastornos del habla en pacientes con EP.

Se realizó una revisión sistemática, siguiendo la guía PRISMA. Se llevó a cabo una búsqueda bibliográfica en las bases de datos: PubMed, Web of Science y Science Direct. Se empleó el modelo PICOS, incluyéndose solo ensayos clínicos aleatorizados donde se evaluará el efecto de una intervención logopédica, comparándola con otras terapias o con un grupo control (GC), en pacientes con EP.

Se analizaron un total de 13 artículos, de los que extrajeron datos referentes a las características de los estudios, las intervenciones y se analizó la calidad metodológica mediante la Escala de Calidad Downs and Black. En tres de los estudios compararon la terapia logopédica estándar con un GC, y con la terapia Lee Silverman Voice Treatment (LSVT-LOUD). En los once estudios restantes compararon está última terapia, con una terapia respiratoria (TR), un GC, un tratamiento articulatorio (ARTIC), y con dos variantes de la terapia LSVT-LOUD, las terapias LSVT- Online y LSVT- ARTIC.

Los resultados de la variable más evaluada, nivel de presión del sonido mostraron una mejora significativa para pacientes que recibieron la LSVT-LOUD frente a TR, GC y LSVT-ARTIC. Por otro lado, la terapia logopédica estándar, mostró resultados significativamente superiores frente al GC. No se encontraron diferencias significativas para la comparativa de LSVT-LOUD frente a LSVT-Online. La mayoría de los estudios mostraron una buena calidad metodológica.

En conclusión, la intervención logopédica mejora los parámetros vocales en pacientes con EP, obteniéndose los mejores resultados en los pacientes que reciben LSVT-LOUD.

I Congreso de Investigadores del PTS. Granada 13-15 Feb. 2019

Modalidad: Póster

Introducción: La lactancia materna es un proceso natural y necesario para un buen desarrollo del bebe. Proporciona igualmente ventajas para la madre. Es el mejor alimento que puede recibir el bebé, pero son muchos los factores que afectan la lactancia materna exclusiva. Algunos modificables y predecibles como por ejemplo la autoeficacia. Esta se define como la confianza en uno mismo en el proceso de amamantamiento. Se ha creado la escala de autoeficacia en la lactancia materna (Breastfeeding Self-Efficacy Scale-Short Form BSES-SF), para poder identificar a las madres con mayor riesgo de abandono de la misma y así desarrollar intervenciones de apoyo a las mujeres lactantes. Objetivo: Valorar la escala de autoeficacia BSES - SF adaptada transculturalmente a madres haitianas con residencia en la población norte de la ciudad de Talca, Chile.

Método: Se utilizó metodología cualitativa mediante grupos focales. El grupo de estudio estuvo constituido por 30 mujeres haitianas. Se les evaluó mediante una historia clínica completa con antecedentes personales y familiares. También se utilizó la escala autoeficacia BSES - SF Resultado: Un 46% de las mujeres gestantes se encontraban entre los 25 y 29 años. También, el 50% tenía un nivel académico incompleto. A continuación se relacionan los ítems de la escala utilizada: 1. Puedo determinar que mi hijo está recibiendo suficiente leche de mi pecho. 2. Puedo enfrentar con éxito el amamantamiento igual como he enfrentado otros desafíos en mi vida. 3. Puedo darle pecho a mi hijo sin necesidad de utilizar fórmulas lácteas (Relleno). 4. Puedo asegurar que mi hijo esta apropiadamente agarrado a mi pecho mientras se alimenta.

5. Puedo manejar a mi bienestar la situación del amamantamiento.

6. Puedo manejar la situación del amamantamiento incluso si mi hijo está llorando.

7. Puedo mantener el deseo de amamantar.

8. Puedo dar pecho cómodamente cuando los miembros de mi familia están presentes.

9. Puedo estar satisfecha con la experiencia de amamantar.

10. Puedo enfrentar el hecho de que la lactancia materna me ocupará tiempo. 11. Puedo terminar de amamantar a mi hijo de un pecho, antes de cambiarlo al otro pecho. 12. Puedo amamantar a mi hijo cada vez que este lo necesite.

13. Puedo cumplir con los requerimientos de amamantamiento de mi hijo.

14. Puedo reconocer cuando mi hijo ha terminado de tomar pecho.

Las modificaciones que se realizaron fueron en el ítem 5, en base a información obtenida por los grupos focales. Se logró la equivalencia semántica, manteniéndose la estructura, secuencia y número de ítems, la que será validada estadísticamente en un próximo estudio. Conclusiones: La adaptación transcultural de la escala BSES - SF al contexto haitiano resulta ser semánticamente coherente y de fácil comprensión para la población inmigrante. Palabras Claves: Autoeficacia, lactancia materna, escala, madres, haitianas

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Modalidad: Oral

Diagnosticar el cáncer en un estadio más precoz podría mejorar la supervivencia y reducir el impacto del tratamiento de cáncer en la calidad de vida. La demora de los pacientes en buscar atención médica por síntomas de cáncer se encuentra entre las principales causas de retraso en el diagnóstico. El objetivo de este estudio fue investigar la relación de la demora de los pacientes con el conocimiento y la interpretación de los síntomas y las creencias sobre el cáncer.

Se hizo una revisión sistemática con meta-análisis según la guía PRISMA. Se incluyeron estudios publicados entre 1990 y 2018, considerando todos los tipos de cáncer. Se consideraron tanto estudios realizados en pacientes recién diagnosticados con cáncer reportando la demora de manera retrospectiva, como estudios en población sana reportando la demora en escenarios hipotéticos. Se analizaron los logORs representando la relación entre 1) la demora y el conocimiento de los síntomas, 2) la demora y la interpretación de los síntomas, y 3) la demora y las creencias sobre el cáncer. Se realizaron meta-análisis basados en modelos de efectos aleatorios. Se evaluó la calidad metodológica de los estudios y se realizaron diversos análisis de moderación y sensibilidad.

Se localizaron 39 estudios de 18 países diferentes, aunque ninguno fue realizado en territorio español. Los estudios incluyeron 42,354 participantes y trataron varios tipos de cáncer (mama, colon-recto, cabeza y cuello, ovario, piel, cérvix y pulmón). Tanto en estudios con población sana, OR=.71, 95% CI [.62, .81], número de estudios k=18, como en estudios con pacientes, OR=.33, 95% CI [.18, .61], k=9, el conocimiento de los síntomas se asoció a menor probabilidad de demorar la búsqueda de atención médica. El conocimiento de los síntomas mostró un efecto protector más fuerte en estudios realizados en países con más desigualdad de ingresos (indicado por el cociente GINI de la World Bank). Diez estudios mostraron que los pacientes que en algún momento pensaron que los síntomas se podían deber a un cáncer tuvieron una menor probabilidad de demorar la búsqueda de atención médica, OR=.51, 95% CI [.30, .87], k=10. Tanto en estudios con población sana, OR=.69, 95% CI [.51, .95], k=10, como en estudios con pacientes, OR=.52, 95% CI [.30, .89], k=6, las creencias positivas sobre el cáncer (p. ej. que es una enfermedad tratable) se asociaron a una menor probabilidad de demorar la búsqueda de atención médica.

Asumiendo una relación direccional, informar a la población sobre la supervivencia, los avances en el tratamiento y los síntomas de cáncer podría reducir la demora del diagnóstico en los pacientes con cáncer y mejorar su pronóstico. Sin embargo, los estudios sobre la demora en el diagnóstico a nivel nacional son escasos y sería recomendable abrir una línea de investigación que ayude a caracterizar y mejorar la práctica actual en nuestro contexto.

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Modalidad: Oral

Background: Heart rate variability (HRV) is a valid and no invasive indicator of cardiac autonomic nervous system function. However, the processing of short-term HRV depends on several factors that are a potential source of bias. It is possible that short-term HRV shows either different inter- or intra-evaluator reliability and the evidence about this issue is scare in the literature.

Aims: To study the inter-and intra-evaluator reliability of data processing on short-term HRV parameters in time-and frequency-domain in three different cohorts.

Methods: This study included 3 different cohorts. A sample composed by 107 children with overweight/obesity (10.03 ± 1.13 years, 58% boys), the second by 132 young adults (22.22 ± 2.20 years, 33% boys) and the third by 73 middle-aged adults (53.62 ± 5.18 years, 48% boys) from the ActiveBrains, the ACTIBATE and the FIT-AGEING studies, respectively. Short-term HRV parameters in time-and frequency-domain were measured with Polar RS800CX®.

Results: the intraclass correlation coefficient (ICC) ranged from 0.822 to 0.989 and from 0.950 to 0.998 for inter-and intra-evaluator reliability, respectively. The coefficient of variation (CV) was lower than 5% and 21.0% for HRV parameters in time- and frequency-domain (inter) and, lower than 4.3% and 13.7% (intra). Limits of agreement of Bland-Altman plots were higher for inter-evaluator analysis compare with intra.

Conclusion: Inter-evaluator reliability of data processing on short-term HRV parameters was lower than intra-evaluator reliability in 3 different cohorts and could elicit significant clinical differences. The data processing of short-term HRV should be performed by the same trained evaluator to obtain consistent HRV parameters.

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Modalidad: Póster

Introducción La artrosis de rodilla es una patología degenerativa muy prevalente asociada a grandes niveles de discapacidad, dolor y perdida de la función. Numerosas propuestas terapéuticas han sido planteadas mostrando tasas variables de efectividad. El objetivo de este estudio ha sido comparar los resultados de un programa de terapia acuática contra un programa de ejercicios en suelo en la calidad de vida de las mujeres postmenopáusica con artrosis de rodilla.

Metodología Se seleccionaron mujeres postmenopáusicas con artrosis de rodilla. La calidad de vida se evaluó mediante el cuestionario Western Ontario and McMaster Universities Osteoarthritis Index (WOMAC) para artrosis de rodilla. Se analizaron todas las subescalas de este cuestionario que incluyen: dolor, rigidez y funcionalidad.

Resultados Finalmente se evaluaron 54 mujeres con artrosis de rodilla con una media de edad de 73,59 5,44. El cuestionario WOMAC mostró diferencias significativas en las subescalas dolor (p=0,009), rigidez (p=0,027) y funcionalidad (p=0,002) entre los grupos ejercicio acuático y ejercicio en tierra.

Conclusión Una intervención de terapia acuática comparada con ejercicios en suelo mostraron que existen diferencias significativas en la calidad de vida a favor del grupo de terapia acuática.

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Modalidad: Oral

El cadmio (Cd) está considerado como un elemento persistente y ubicuo. A pesar de que la mayor parte de la población general está expuesta a dosis relativamente bajas, existen controversias acerca de sus posibles efectos adversos sobre la salud a largo plazo. Este estudio se concibió como un primer paso para evaluar la idoneidad del tejido adiposo como matriz biológica para estimar la posible exposición crónica a Cd. Específicamente, el objetivo de este trabajo fue cuantificar los niveles de Cd en muestras de tejido adiposo e identificar sus principales determinantes sociodemográficos, dietéticos y de estilo de vida.

El estudio se realizó sobre una submuestra de la cohorte GraMo constituida por 226 adultos reclutados de dos hospitales públicos de Granada (España). Los niveles de Cd en tejido adiposo fueron analizados mediante ICP-MS. Las variables independientes se recogieron a través de cuestionarios. Los factores asociados a las concentraciones de Cd se evaluaron mediante regresión lineal multivariante.

Se encontraron niveles detectables de Cd en el tejido adiposo de todos los participantes del estudio, con una concentración media (± desviación estándar) de 12,66±18,91 ng/Kg. Los niveles de Cd aumentaban con la edad (β=0.014; p<0.001), y los hombres mostraron concentraciones más bajas que las mujeres (β= -0.424; p<0.001). El grado de obesidad, medido como índice de masa corporal (IMC), se asoció negativamente con las concentraciones de Cd (β=-0.038; p<0.001). El hábito tabáquico se asoció con un incremento gradual de las concentraciones de Cd en el tejido adiposo (β exfumadores=0,502 [p<0,001]; β fumadores=0,669 [p<0,001]), y el consumo de ≥2 huevos/semana se asoció positivamente con las concentraciones de Cd (β=0,241; p=0,025). Además, se observaron niveles más altos de Cd entre los hombres que declararon exposición habitual a pinturas, pero no en las mujeres.

Nuestros resultados son consistentes con las fuentes de Cd conocidas y sugieren otras vías potenciales que podrían ser específicas de la población de estudio. En conjunto, nuestros hallazgos subrayan la posible relevancia del tejido adiposo como matriz biológica para la caracterización de la exposición al Cd, así como para la evaluación de sus implicaciones clínicas a largo plazo, particularmente en patologías relacionadas con la obesidad.

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Modalidad: Póster

La obesidad es una enfermedad crónica de origen multifactorial que afecta a nivel global. Estudios anteriores demuestran que la melatonina disminuye la ganancia de peso a través de mecanismos termogénicos. Los objetivos principales del presente estudio son determinar si la melatonina in vitro es capaz de transdiferenciar los adipocitos blancos derivados de células mesenquimales procedentes del tejido adiposo inguinal de rata Zücker en fenotipo beige y comprobar el origen de éstos adipocitos beige tras un tratamiento in vivo con melatonina.

Para llevar a cabo este trabajo, se extrajeron células mesenquimales del tejido adiposo blanco inguinal de rata Zücker por digestión con colagenasa y posterior centrifugación y fueron caracterizadas por citometría de flujo (CD73+, CD90+ y CD45-). Posteriormente se indujo la diferenciación usando el kit comercial LONZA que contiene insulina, indometacina, IBMX y dexametasona una vez confluentes, y se caracterizó la diferenciación determinando la acumulación lipídica por tinción con Oil-Red O. Los adipocitos diferenciados fueron tratados con melatonina 50nM durante 24h y por último se lisaron las células y se determinó por Western-Blot las proteínas termogénicas UCP1, CITED1 y PGC1-α obteniendo un aumento en dichas proteínas tras el tratamiento in vitro con melatonina con respecto a las células mesenquimales no diferenciadas y los adipocitos no tratados, más notablemente en CITED1 que casi dobla su expresión. Además, se aislaron células mesenquimales de grasa inguinal de 4 grupos de ratas Zücker (delgadas sin tratar con melatonina (ZL-C), delgadas tratadas (ZL-M), diabéticas y obesas sin tratar con melatonina (ZDF-C) y diabéticas y obesas tratadas (ZDF-M)) y una vez confluentes se procedió a su lisado para la determinación de UCP1 mediante Western-Blot observando que originalmente en las células mesenquimales de las ratas delgadas hay expresión de UCP1 y tras ser tratadas con melatonina, se triplica su expresión; y que las células mesenquimales procedentes de las ratas obesas con diabetes de forma natural no expresan UCP1 y cuando son tratadas con melatonina comienzan a expresarla.

Conclusión: la melatonina in vitro induce una parcial transdiferenciación (leve aumento en la expresión de UCP1) de adipocitos blancos a beige, pues se obtiene un aumento significativo en la expresión de CITED1; además, la melatonina in vivo induce la diferenciación de células mesenquimales de la grasa inguinal de las ratas obesas diabéticas (aumento significativo en la expresión de UCP1 indicando la diferenciación de la grasa blanca inguinal a beige).

El siguiente paso será extrapolarlo a humanos, donde se contará con grasa de diferentes localizaciones (visceral y subcutánea) de la que se aislarán células mesenquimales para la inducción in vitro del browning con melatonina.

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Modalidad: Póster

This study aimed to assess the association of short- and long-term exposure to pesticides with circulating levels of thyroid and reproductive hormones in an agricultural population in the South of Brazil. Serum specimens from 122 male and female adults residing in small agricultural properties were sampled both in the low and high pesticide use season. A comprehensive questionnaire was used to collect detailed information on recent and cumulative lifetime use of pesticides and other agricultural-related exposures. The difference in serum hormone levels between seasons was assessed by the T-test and Wilcoxon test for paired samples, and associations between pesticide exposure-related variables and hormone values were explored by multivariate linear regression analysis. Levels of total thyroxine (T4) and male testosterone were significantly reduced from the low to high pesticide use season. In the high exposure season, recent use of dithiocarbamate fungicides, not using full personal protection equipment, and use of manual equipment in the last pesticide application was associated with reduced levels of thyroid-stimulating hormone (TSH), while recent use of the pyrethroid lambda-cyhalothrin and the fungicide phthalamide was associated with increased luteinizing hormone (LH) in men. We also found associations of lifetime years of agricultural work with reduced male testosterone and of lifetime years of farm work and use of various pesticide classes (i.e. insecticides, herbicides, organophosphate insecticides, dithiocarbamate fungicides, and pyrethroids), mancozeb (fungicide), and paraquat (herbicide) with slight changes in free or total levels of T4 and/or triiodothyronine (T3). Findings suggest that both short- and long-term exposure to agricultural pesticides may alter thyroid hormones and male testosterone levels among farm residents.

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Modalidad: Póster

Introducción: La esclerostina es una glicoproteína expresada principalmente por osteocitos, cuya acción es inhibir la formación del hueso. Recientes estudios han mostrado un incremento de niveles de esclerostina en suero de pacientes con diabetes mellitus tipo 2 (DM2) y eventos cardiovasculares (ECV), sugiriendo un papel adicional de esta proteína a nivel vascular. La hipótesis de que la esclerostina podría ser expresada por células del músculo liso vascular (CMLV) en condiciones de calcificación podría justificar esta elevación. Sin embargo, hay pocos datos a nivel de tejido.

Objetivo: Correlación entre los niveles de esclerostina sérica en pacientes no diabéticos y con DM2 con ECV y el nivel de expresión transcripcional e inmunohistoquímico en el tejido vascular femoral de pacientes con DM2 con aterosclerosis y tejido vascular no aterosclerótico de donantes sanos.

Métodos: Los niveles de esclerostina sérica se determinaron en 75 sujetos con DM2 y con y sin ECV y en 55 sujetos no diabéticos mediante un kit de ELISA comercial (Biomedica). La expresión de esclerostina se determinó mediante RT-qPCR a partir de 400 ng de ARN total de 45 secciones de tejido arterial femoral aterosclerótico de sujetos con T2D, así como de controles sanos. La detección inmunohistoquímica de esclerostina se realizó en secciones de tejido vascular parafinado usando anticuerpos específicos antiesclerostina 1:50 (Sigma Aldrich) y detección cromogénica.

Resultados: Los niveles séricos de esclerostina fueron significativamente más altos en sujetos DM2 con ECV en comparación con los controles. Se observó una mayor expresión de esclerostina a nivel transcripcional e inmunohistoquímico en la arteria femoral aterosclerótica de pacientes con DM2 en comparación con la arteria femoral de controles sanos.

Conclusiones: El aumento de la esclerostina sérica asociada con la ECV en DM2 podría estar relacionado con una mayor expresión de esta proteína por el tejido vascular. Esto sugiere la implicación de la esclerostina en el proceso de calcificación vascular.

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Modalidad: Póster

Objectives: 1) To determine the concentrations of bisphenol A (BPA) and parabens in socks for infants and young children collected from Spain, 2) to assess the (anti-)estrogenicity and (anti-)androgenicity of extracts from the socks, and 3) to estimate dermal exposure doses to these chemicals. Methods: Thirty two pairs of socks for infants (1-12 months) and young children (12-48 months) were collected from 3 stores in the city of Granada (Spain). Textile from three different sections of the sock, i.e.: foot, toe, and leg, was cut, leading to a total of 96 samples for chemical analysis. Hormone-like activities were determined in textile samples corresponding to the foot section of sock (32 samples) by using two receptor-specific bioassays, the E-Screen for (anti-)estrogenicity and PALM luciferase assay for (anti-)androgenicity. Chemical concentrations were assessed by store, textile composition (% cotton, polyamide, polyester, and spandex), color, country of origin, and section of the sock analyzed. Results: BPA was present in 90.6% of samples at concentrations ranging from <0.70 to 3736.39 ng/g. BPA levels were  25 times higher in socks from store 1 (low-cost retailer), which had a lower price and a higher cotton content compared to stores 2 (international fast-fashion retailer) and 3 (higher-quality international brand). Ethyl-paraben (EPB) was found in all samples at levels in the range 1.01-9.21 ng/g, methyl-paraben (MPB) in 81% of samples at levels in the range <0.50-23.82 ng/g, and propyl-paraben (PPB) in 43.7% of samples at levels in the range <0.40-2.45 ng/g. None of the samples presented butyl-paraben. MPB and EPB levels were higher in socks with lower cotton content, whereas propyl-paraben and total parabens (∑ PBs) concentrations were higher in socks with higher cotton content. Almost all socks from store 1 (83.3%) showed estrogenic activity, with values ranging from 48.16 to 6051.49 pM E2eq/g, while only three samples from stores 2 and 3 exhibited estrogenic activity. Six out of 32 socks samples (18.7%), all from store 1, showed anti-androgenic activity ranging from 94.39 to 2988.79 μM Proceq/g. The estimated dermal exposure doses to BPA from the use of socks were higher for 36-48 months old children (median: 17.58 pg/kg/day), and dermal exposure doses to ∑ PBs were higher for 24-36 months old children (median: 0.60 pg/kg/day). Conclusions: Our results evidenced, for the first time in Europe, the wide occurrence of BPA and parabens, particularly MPB and EPB, in socks marketed for infants and young children, and suggested that BPA contributes to estrogenic and anti-androgenic activity of socks extracts.

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Modalidad: Póster

Introduction: Childhood obesity is one of the most serious public health challenges of our times. Although an important body of experimental evidence highlights the obesogenic potential of endocrine disruptors such as bisphenol A (BPA), the epidemiological evidence remains inconclusive and still limited.

Objective: To assess associations between urinary BPA concentrations and several adiposity measures among peripubertal boys from the Environment and Childhood (INMA) cohort in Granada, Spain.

Material and Methods: BPA concentrations were determined in spot urine samples from 298 boys aged 9-11, and child’s weight, height, waist circumference and percentage of body fat mass were evaluated. Overweight/obesity was defined as BMI z-scores ≥85th percentile, and abdominal obesity as a waist-to-height ratio (WHtR) ≥0.5. Associations were assessed using multivariable linear and logistic regression models.

Results: In adjusted models, each natural log-unit increase in urinary BPA concentrations was associated with higher BMI z-scores (β=0.22; 95%CI= 0.03, 0.41) and increased odds of overweight/obesity (OR=1.46; 95%CI= 1.05, 2.05). Children with higher BPA concentrations presented higher WHtR values (β=0.007; 95%CI= -0.001, 0.015), and BPA was associated with a higher risk of abdominal obesity (OR=1.45; 95%CI= 1.03, 2.06). No associations were found with body fat mass.

Conclusions: BPA could exert an obesogenic effect in peripubertal boys, potentially increasing the risk of overweight/obesity, mainly abdominal obesity. However, given our modest sample size and the possibility of reverse causality and residual confounding by dietary habits and lifestyle, these results must be interpreted with caution.

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Modalidad: Póster

INTRODUCCION No hay ninguna sociedad que no se vea afectada por el problema social de la falta de vivienda y múltiples aspectos negativos padecen las personas sin hogar (PSH), entre ellos enfermedades físicas y psicológicas. Casi la mitad de ésta población dicen sentirse feliz pero pocos trabajos han centrado su atención en otros aspectos como su felicidad, limitando de este modo la capacidad de incorporar otras perspectivas y crear intervenciones efectivas. Las personas parecen adaptarse mejor a las cuestiones económicas que a las no económicas y la relación entre ingresos y felicidad resulta relativamente pequeña en comparación con otros factores que contribuyen al bienestar subjetivo entre las personas que viven en condiciones de pobreza.

OBJETIVOS

1-Conocer el porcentaje de PSH que dicen sentirse felices e infelices.

2-Conocer porcentaje de posibles factores relacionados: variables sociodemográficas y clínicas, si se sienten discriminados, si tienen expectativas de futuro y si se sienten bien consigo mismos.

METODOLOGIA Estudio transversal en 14 personas sin hogar en Granada Criterios de inclusión: personas sin hogar en Granada que visitan la Asociación Calor y Café de Octubre de 2017 a Febrero de 2018. Se excluyeron personas con discurso incoherente.

Instrumentos de medida: -Escala de Felicidad de Vázquez. -Cuestionario de variables sociodemográficas, clínicas y factores relacionados con la felicidad .

RESULTADOS: Doce son hombres, las edades estuvieron comprendidas entre los 41 y 66 años, dos son extranjero, nueve de ellos dicen tener mala salud, la mitad se sienten discriminados, el 43% no tienen estudios o solo estudios primarios, la mitad de ellos dicen sentirse felices, once refirieron sentirse bien con ellos mismos y todos tenían expectativas de mejorar en el futuro.

DISCUSION Concordante con el estudio de Panadero (2013), la mitad de las PSH dijeron ser infeliz frente al 10% en la población general según el Instituto Nacional de Estadística (2013). Pese a la situación en la que se encuentran las PSH, la mitad se sienten discriminados e infelices y más de la mitad dicen tener mala salud, todos tenían expectativas de mejora y la mayoría se sienten bien con ellos mismos. Es necesario un estudio en profundidad, con abordaje cualitativo, para conocer que aspectos consideran en valor las PSH para sentirse felices.

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Modalidad: Póster

1.Introducción La fisura anal es un desgarro longitudinal doloroso de la mucosa anal. Su etiología es multifactorial. La localización más frecuente es bien en rafe anterior o posterior donde la vascularización es más precaria. Fisuras anales en otras localizaciones y resistentes a tratamiento han de hacernos pensar en etiologías atípicas. 2.Objetivos. Presentamos un caso de fisura anal como manifestación de una enfermedad dermatológica del colágeno diagnosticada durante el estudio de la misma. 3.Material y métodos Paciente de 26 años de edad que acude a Nuestra Consulta por rectorragia y prurito anal así como proctalgia con la defecación de años de evolución. Diagnosticada de fisura anal que no responde a tratamiento. En la exploración se observan tres fisuras anales de localización atípica y con leve hipertonía esfinteriana. Dado el cuadro clínico y mala evolución se decide toma de biopsia que informa de epidermiolisis bullosa. La paciente fue derivada al Servicio de Dermatología para completar estudio y el tratamiento médico adecuado. 4.Resultados La fisura anal es un desgarro longitudinal doloroso de la mucosa anal. Se acompaña de un espasmo doloroso del esfínter anal interno. Este espasmo disminuye el suministro de sangre que junto con el traumatismo en la defecación llevan al desarrollo de la fisura. Se consideran factores etiológicos las heces duras, el estreñimiento, la diarrea crónica y la enfermedad de Crohn. En estos casos las localizaciones más habituales son el rafe anterior y posterior. El tratamiento médico consiste en la aplicación tópica de corticoides, anestésicos locales y laxantes con altas tasas de éxito ( en algunas series de hasta el 90% ). El uso de pomadas con nitrato de glicerina consigue tasas de curación aún superiores. El tratamiento quirúrgico de elección en fisuras que no responden a tratamiento médico es la esfinterotomía lateral interna con tasas de curación de hasta un 99%. En el caso de fisuras de localización atípica y que no responden al tratamiento convencional hemos de pensar en otras etiologías como el cáncer anal, la sífilis, el VIH, la tuberculosis, la leucemia y enfermedades del colágeno como la epidermiolisis bullosa en nuestro caso. En estas ocasiones el diagnóstico requiere, en la mayoría de los casos, una biopsia que confirme el mismo. 5.Conclusiones La fisura anal es una patología muy frecuente en nuestro medio. En los casos de localización atípica y resistentes al tratamiento convencional hemos de pensar en otras etiologías como las enfermedades dermatológicas para su correcta evaluación y tratamiento.

Capítulo 6
DESARROLLO DE NUEVOS FÁRMACOS

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Modalidad: Oral

Malaria is a widespread disease in tropical and subtropical regions and an estimated 3.2 billion people are at the risk of suffering it, with 0.5-1 million deaths reported in 2014. Due to the low variety and structural diversity of antimalarial drugs currently available in the clinic, the increasing number of cases of resistance against these drugs, and the fact that microbial natural products have not been yet exhaustively explored in the search for new antiparasitic drugs, these compounds offer a valuable source for the discovery of new and interesting hits [1].

With the aim of finding new natural products with antimalarial properties, a subset of 22,000 microbial extracts from the MEDINA collection was screened using a phenotypic HTS based on measurements of Plasmodium falciparum lactate dehydrogenase [2]. Active hits were subjected to chemical dereplication using LC-MS and LC-NMR to discard samples containing known antimalarial and/or cytotoxic molecules.

Hits containing potentially new molecules were re-fermented at 1L scale and the compounds responsible for the bioactivity of the extracts were isolated following bioassay-guided processes. Several new natural products with activity in the micromolar range were obtained using this approach, including lasionectrin, MDN-0104, pepstatin K, and two cyclic hexapeptides. Additionally, MDN-0185, a new polycyclic xanthone with potent IC₅₀ in the nanomolar range against P. falciparum 3D7 was also obtained.

The approach used in this work confirms once more that microbial natural products continue to be a rich and underexploited source of novel molecules that might lead to the discovery of new and interesting drugs.

References

[1] K. Kaur, M. Jain, T. Kaur, R. Jain. Bioorg. Med. Chem. 2009, 17, 3229-3256.

[2] G. Pérez-Moreno, J. Cantizani, P. Sánchez-Carrasco, L. M. Ruiz-Pérez, J. Martín, N. El Aouad, I. Pérez-Victoria, J. R. Tormo, V. González, I. González, N. de Pedro, F. Reyes, O. Genilloud, F. Vicente, D. González-Pacanowska. PLoS ONE 2016; 11, e0145812

I Congreso de Investigadores del PTS. Granada 13-15 Feb. 2019

Modalidad: Oral

Los parásitos tripanosomátidos son responsables de graves enfermedades olvidadas como la leishmaniasis (Leishmania spp.), la enfermedad de Chagas (Trypanosoma cruzi) y la enfermedad del sueño (Trypanosoma brucei), para las que los tratamientos actuales no son adecuados. Una estrategia atractiva para buscar nuevos fármacos consiste en aprovechar diferencias bioquímicas entre estos organismos y el hombre. Una de estas diferencias reside en el metabolismo del hemo, un grupo prostético que forma parte de proteínas implicadas en muchos procesos fisiológicos esenciales, ya que los tripanosomátidos son auxótrofos para el hemo y necesitan tomarlo del hospedador. Por tanto, las proteínas involucradas en la captación de hemo podrían considerarse atractivas dianas terapéuticas sobre las que dirigir nuevos fármacos.

T. brucei obtienen hemo exclusivamente a través de la endocitosis mediada por receptor del complejo haptoglobina-hemoglobina (Hp-Hb) presente en la sangre, mientras que Leishmania puede obtener hemo a través de la endocitosis de la Hb o por su captación directa a través un transportador de la familia HRG (LHR1), situado en la membrana plasmática del parásito. En este trabajo, mostramos que LHR1 y su homólogo en T. brucei (TbHRG), también juegan un papel esencial en el rescate del hemo procedente de la Hb endocitada. Estas proteínas se localizan también en el compartimento endolisosomal donde se digiere la Hb, y son responsables de la salida del hemo liberado hasta el citosol. Para demostrarlo, además de sistemas homólogos (L. major y T. brucei) expresando distintos niveles de los transportadores, hemos usado un sistema heterólogo de levaduras auxótrofas para el hemo (hem1). La expresión de LHR1 y TbHRG en la vacuola digestiva de estas levaduras les permite crecer en presencia de bajas concentraciones de Hb exógena, al importar el hemo liberado en este organelo hasta el citosol. Finalmente, hemos comprobado que estas proteínas son esenciales en ambos parásitos. Como además tienen un grado de similitud muy bajo con su ortólogo humano, podrían suponer una nueva diana de actuación para la lucha contra estas enfermedades.

Para explotar esta posibilidad, hemos aprovechado este sistema de expresión en levadura para desarrollar un test de cribado HTS dirigido a diana pero dentro de un contexto celular. Para ello, las levaduras Δhem1 expresando los transportadores de parásitos se crecieron en presencia de Hb y de un compuesto que, si inhibe a los transportadores, impide el crecimiento de la levadura y su actividad catalasa, una hemoproteína usada como reportera de los niveles citosólicos de hemo. Hemos validado este ensayo utilizando una colección de fármacos de reposición y hemos identificado varios inhibidores que han mostrado actividad sobre T. brucei y Leishmania en el orden nanomolar. Como esta familia de transportadores HRG está presente en otros patógenos, este sistema podría utilizarse para identificar fármacos frente a otras patologías.

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Modalidad: Póster

During HIV-1 infection, the envelope subunit gp41 mediates fusion between viral and host cell membranes. This process is driven by gp41 folding into a highly-stable trimer of helical hairpins formed by the interaction between N-terminal (NHR) and C-terminal (CHR) heptad-repeat regions. In this interaction a hydrophobic pocket on the NHR surface reveals to be of high importance and its occupancy interferes with the NHR-CHR interaction of gp41. Accordingly, small-molecules binding the hydrophobic pocket constitute promising therapeutics against HIV-1 infection. In our previous work (1), we rationally designed and engineered single-chain protein constructs that accurately mimic the NHR coiled-coil surface. These three-helix protein constructs (named covNHR) show high structural stability and solubility, bind the CHR region of gp41 with high affinity and possess nanomolar in vitro inhibitory activity for a variety of HIV-1 strains. 8-Anilinonaphthalene-1-sulfonic acid (ANS) is a fluorescent probe that binds to solvent-exposed hydrophobic patches in proteins and is widely used to characterize exposed hydrophobicity and partial unfolding or misfolding in proteins. Here, we investigate whether ANS can interact with our covNHR protein used as structural mimic of the gp41 NHR region. Binding of ANS to our covNHR protein (covNHR-VQ) was measured by Near-UV Circular Dicroism and Fluorescence. Isothermal Titration Calorimetry (ITC) experiments indicate direct binding between ANS and covNHR-VQ with a 1:1 stoichiometry and a KD of  5 μM. The mode of binding was assessed using molecular docking using the X-ray structure of covNHR-VQ and the results show that ANS binds within the NHR hydrophobic pocket also revealing that protein-ligand interactions share common characteristics with known small-molecule inhibitors. Molecular docking results were validated using 100 ns Molecular Dynamics simulations that show the stability of the docking pose through the entire simulation time. These results indicate that ANS is capable of binding to the NHR hydrophobic pocket with moderate affinity and therefore, ANS and its derivatives constitute promising lead compounds to inhibit the NHR-CHR interaction. ANS displacement, as a fluorescent probe, can also serve as tool for High Troughput Screening (HTS) using covNHR-VQ as structural mimic of gp41.

(1) Crespillo, S. et al., Single-chain protein mimetics of the N-terminal heptad-repeat region of gp41 with potential as anti-HIV-1 drugs, PNAS 111 (51), 18207-18212.

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Modalidad: Póster

The prevalence of multi-drug resistant pathogenic microorganisms, especially Gram-negative bacteria, is already a serious global threat. The wide spread increase of bacterial resistance towards conventional antibiotics makes necessary to address this urgent clinical need and encourages the exploration of novel antimicrobial molecules.

The IIMENA project (www.iimena.org) aims to integrate state-of-the art screening technologies, bioinformatics and metabolic engineering approches in order to identify and characterize novel secondary metabolites from actinomycetes, which can become lead-candidates for antibiotic drug development [1]. As a partner of this project, MEDINA is combining smart antibacterial screening and compound dereplication strategies [2] in order to identify new talented producer strains able to biosynthesize promising antibiotics. Candidate compounds with the desired antimicrobial profile will be subjected to pre-clinical testing to evaluate their potential as novel antibiotic leads.

As a result of this work with an initial set of antimicrobial extracts, different new natural products with antibacterial activities have been isolated and structurally characterized from MEDINA’s actinomycetes collection, including two new policyclic xanthones and one new nosokomycin member with an unusual lipidic moiety.The structures of these new molecules were established on the basis of MS/MS fragmentation and 2D-NMR spectroscopic data.

Antibacterial activities of these new natural products were evaluated against Gram-negative bacteria Escherichia. coli, Acinetobacter. baumannii, Klebsiella pneumoniae and Pseudomonas aeruginosa. Some of these compounds displayed significant bioactivities with MIC values in the low micromolar range.

These new antibacterial agents isolated from MEDINA’s microbial collection highlight the importance of natural products as a source of potential new antibiotic lead candidates.

References

[1] O. Genilloud. Nat Prod Rep, 2017, 34, 1203-1232.

[2] I. Pérez-Victoria, J. Martín, F. Reyes. Planta Med., 2016, 82, 857-871.

Acknowledgments: Research reported in this communication is part of the IIMENA project which is supported by Novo Nordisk Foundation (NNF).

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Modalidad: Póster

Son múltiples los órganos que se pueden ver afectados y manifestar su mal funcionamiento con una reacción de dolor. Pero sea cual sea el tipo de dolor al que nos exponemos, siempre se va a elegir como primera opción terapéutica los analgésicos por excelencia, los AINE (antiinflamatorios no esteroideos). En este grupo se incluyen gran cantidad de principios activos, muy diversos, aunque todos comparten sus acciones farmacológicas entre las que se destacan: antiinflamatoria, analgésica y antipirética. Pertenecen a los fármacos más utilizados a nivel mundial, y en España destacan entre los 15 grupos de medicamentos más utilizados. Tenemos una patología muy frecuente, pero que a su vez dispone de un gran abanico de opciones terapéuticas, y que, además, algunos de ellos son bastante seguros ya que se administran a bebés desde los primeros meses de vida. El problema se encuentra en los inconvenientes que presentan los principios activos de este grupo (falta de selectividad, eliminación rápida del organismo, daño gástrico…) y que a pesar de estos y muchos más problemas siguen siendo de los medicamentos más utilizados.

Con el objetivo de mejorar la administración de este tipo de medicamentos, la Tecnología Farmacéutica ha permitido el desarrollo de diferentes sistemas nanométricos que contienen el principio activo (moléculas o fragmentos de moléculas) en su interior comportándose como un vehículo capaz de transportarlo. De este modo, permiten que el fármaco que lleva asociado pueda atravesar las diferentes barreras biológicas del organismo lo cual no se podría realizar con los convencionales sistemas de liberación ya que en éstos son fundamentalmente las propiedades fisicoquímicas las que condicionan su absorción y biodistribución. En el póster se representa la síntesis de nanopartículas mesoporosas de silicio por el método modificado sol-gel y la encapsulación exitosa de ibuprofeno.

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Modalidad: Póster

Hyaluronic acid (HA), initially perceived only as an inert component of connective tissue, it is now known to be involved in multiple signaling pathways, including those implicated in cancer pathogenesis and progression¹.

The regulation of interactions of HA with its HA-binding proteins, hyaladherins, is crucial for fundamental physiological processes, but also for pathological conditions in which HA affects cell proliferation, migration and differentiation. The transmembrane glycoprotein CD44 is encoded by a single gene which is expressed on the majority of cells (including several tumor cells) and is a main HA-binding receptor. CD44 has been shown to mediate cell - cell and cell - Extracellular matrix (ECM) interactions and contribute growth and metastasis of some tumors.

HA-CD44 interaction promotes multiple signalling pathways leading to cancer cell growth, adhesion, migration, invasion and metastasis. Then, targeting CD44 presents a very promising approach against HA-induced tumourigenesis².

Anti-CD44 antibodies have shown to interrupt HA-CD44 interaction, however, a clinical trial initiated to study the utility of them in chemotherapy was stopped due to toxicity³.

Recently, the first nonglycosidic small molecules inhibitors of CD44 were described. Using biophysical binding assays, fragment screening, and crystallographic characterization, an inducible pocket adjacent to the HA binding groove was discovered. Interactions of fragment combination and structure-driven design have established the tetrahydroisoquinoline (THIQ) scaffold as an attractive starting point for lead optimization⁴.

Taking the THIQ scaffold as the lead, we have designed, synthesized and characterized a novel series of THIQ derivatives. The evaluation of these compounds as inhibitors of HA-CD44 interaction is the next step of this project. For this purpose, mRNA levels of CD44 of different tumor cell lines have been measured by RT-PCR to select the best cell line model. Based on these results, we have selected the breast cancer MCF7 cell line as model for evaluation of CD44 inhibitors. Currently, we are carrying out the optimization of HA-CD44 assay. Using HA fluorescently labeled (HA-FITC) we have study the HA-CD44 interaction by flow cytometry. This assay will allow us to test the inhibitory profile of our compounds in next stages.

(1) Okuda H, Kobayashi A, Xia B et al., Cancer Res., 2012, 72, 537-547.

(2) Misra S, Heldin P, Hascall V, Karamanos N et al., FEBS J., 2011, 278, 1429-1443.

(3) Riechelmann H, Sauter A, Golze W., Oral Oncol., 2008, 44, 823-829.

(4) Liu LK, Finzel BC. J., Med. Chem., 2014, 57, 2714-2725.

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Modalidad: Póster

Tropical diseases such as malaria, Chagas, leishmaniasis and sleeping sickness remain global health issues that affect about half of the world’s population. These four parasitic protozoan diseases are responsible for the death of hundreds of thousands of people per year and also cause untold suffering in millions of others living in the world’s poorest tropical regions. With persisting problems of resistance, toxicity and cumbersome administration of current drugs against these protozoan diseases (most of the drugs are outdated), there is an urgent need for the discovery of next-generation antiprotozoal compounds against such debilitating diseases. Natural products have historically provided novel chemical scaffolds from which potent antiprotozoal drugs have been developed. Herein we report the establishment of a tropical disease drug discovery platform at MEDINA/IPBLN-CSIC and the potential use of this platform in the screening of the over 130,000 microbial extracts included in Fundación MEDINA’s collection. We also report the exciting new compounds that have already been discovered from the screening of a small subset of our extracts collection and the potential chemotherapeutical applications of the compounds discovered so far.

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Modalidad: Póster

Fundación MEDINA (MEDicamentos INnovadores en Andalucía) is one of the high throughput screening centers of EU-OPENSCREEN-ERIC, the new infrastructure officially announced on March 21, 2018 by the European Official Journal of the EU as European Research Infrastructure (ERIC), a transnational infrastructure established after an extensive selection process by the members countries and the European Research Forum for Research Infrastructures (ESFRI).

EU-OPENSCREEN is a consortium of 24 research organizations involving screening and chemistry centers from seven funding member states (the Czech Republic, Finland, Germany, Latvia, Norway, Poland and Spain) and one international research organization (EMBL). Under the coordination of the Berlin central office (Leibniz-Institut für Molekulare Pharmakologie, FMP), EU-OPENSCREEN integrates a network of high capacity screening centers and a library of 140.000 commercial compounds. EU-OPENSCREEN main objective is the establishment of a research infrastructure responding to the needs of European academic institutes, biotech companies and industry, looking forward to advancing research in chemical biology and promote drug discovery. EU-OPENSCREEN offers the access to a network of European leading screening platforms and medicinal chemistry centers and to a common compound library.

As funding member state Spain contributes with three screening center nodes including, in addition to FUNDACIÓN MEDINA in Granada, the Centro de Investigación Príncipe Felipe in Valencia (CIPF), and the Universidad de Santiago de Compostela (USC). FUNDACIÓN MEDINA is one of the high capacity screening centers in Europe, and an international reference for the discovery of new drugs from microbial natural and synthetic products. MEDINA develops research programs focused on new drugs for infectious diseases (including tuberculosis and tropical diseases), cancer and neurodegenerative diseases as well as new metabolomic biomarkers. In addition, MEDINA is a Node of the Spanish Network for Drug Discovery (REDEFAR) operating under the USC coordination and MINECO funding.

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Modalidad: Oral

Lanthipeptides are a major class of ribosomally synthesized and post-translationally modified peptides (RiPPs) characterized by the presence of amino acids lanthionine (Lan) and methyllanthionine (MeLan).

As part of our antibiotic discovery programs from microbial sources, we have isolated and structurally characterized a novel glycosylated lanthipeptide, MDN-0207, from a strain of Streptomyces cacaoi from MEDINA’s culture collection. This new lanthipeptide contains 23 amino acids and presents unprecedented structural features, such as an unusually high number of D-amino acids and a glycosylated tyrosine residue carrying a non-previously reported disaccharide. Structural elucidation of the new lanthipeptide was carried out through a combination of HRMS/MS, NMR analysis, exploratory chemistry and genome mining.

MDN-0207 shows significant antibacterial activity against a panel of gram-positive human pathogens, with potent bioactivities (MIC 0.5 ug/mL) against MRSA and moderate activity against a clinical isolate of Clostridium difficile (MIC 4 ug/mL).

Gene expression bioreporters for cell wall, DNA, RNA and protein synthesis suggested major pathways affected. Preliminary mode of action results clearly show that MDN-0207, interferes with the Lipid II biosynthesis cycle, and does not behave as a classical Lipid II binder. Furthermore, MDN-0207 does not inhibit in vitro Lipid II biosynthesis and in contrast to vancomycin, no inhibition of a late peptidoglycan biosynthesis step is observed, since no accumulation of UDP-MurNAc-pentapeptide occurs. These preliminary results suggest an unusual mode of action related with cell wall biosynthesis and a lipid II cycle interference that is being further investigated.

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Modalidad: Póster

Cancer remains a leading cause of death worldwide in spite of numerous efforts made in the anticancer drug discovery. One of the reasons for the lack of new therapeutics could be the inefficient drug discovery models using a classic two-dimensional (2D) cell culture, since it cannot recreate in vivo conditions such are cell-cell interactions and gradients of oxygen, nutrients, metabolites, and soluble signals, thus creating heterogeneous cell populations. Therefore, overwhelming number of promising anticancer agents from 2D models often resulted in no activity when studied in in vivo. These discrepancies suggested the need of developing high throughput in vitro tumor models which simulate more closely the in vivo conditions. Precisely that has been achieved with three-dimensional (3D) tumor cell culturing. Spheroids capture the complexity of solid tumors and its concentric arrangement of heterogeneous cell populations, essential for tumor growth and resistance.

MEDINA’s main objective is to discover molecules with attractive biological and chemical properties as well as other therapeutic approaches suitable to industrial exploitation. With the aim to increase the Screening Drug Discovery tools in MEDINA, the spheroids were introduced into the antitumor drug screening process since they mimic in vivo physiology incomparably better than the standard 2D culturing. In this way, the results obtained in vitro will have higher probability to translate to clinical trials.

In order to evaluate spheroid viability and determine cytotoxicity of the potential antitumor drugs, two approaches have been established. First, the high-throughput method for measuring the live/death cell ratio using resazurin assay as a primary screening. Once the antitumor activity is observed, the next step is to confirm it in an image-based secondary assay. To that purpose a three-dye staining method has been introduced that provides an insight in the mechanism of cytotoxicity. As an indicator of the live/proliferating cells, Calcein AM has been used, propidium iodide marking the dead cells and Hoechst as counter stain for the nuclei. Applying this method, we are able to distinguish active compounds that kill the tumor cells within the spheroid, other compounds that disintegrate the spheroid/tumor as well as others that reduce the spheroid size; all of them suggesting different mode of action. These findings about the different antitumor effects could not have been obtained with the classic monolayer (2D) culturing and indicate the importance of the three-dimensional (3D) tumor cell culturing as a crucial tool in the anticancer drug discovery.

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Modalidad: Póster

Natural products produced by actinobacteria have demonstrated an important role in drug discovery and they still have a great potential for the discovery of new bioactive compounds. Actinomycetes are one of the most productive microbial communities in soil and they are especially rich in plant rhizospheres. In an attempt to isolate novel actinomycetes to discover new potential producers of antimicrobial compounds against human pathogens, we studied the rhizosphere microbial communities of Sonchus crassifolius and Limonium majus, two south-eastern Spain endemic plants from the area of El Margen (Granada). We assessed the diversity of the microbial community obtained following the different isolation approaches, and all the isolates were identified taxonomically on the basis of their macro and micromorphology, and their 16S rDNA gene sequences. The microbial population presented a wide diversity, not only within members of the genus Streptomyces, but also within other minor taxa of Actinobacteria as well as other groups of eubacteria. A selection of 215 strains including the most diverse and representative microorganisms were selected to be cultivated in 96-well plate microfermentations and extracted to be screened for the production of new antimicrobial agents active against a panel human pathogens (Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter baumannii, Escherichia coli, Staphylococcus aureus MRSA, Candida albicans). Our results confirm that rhizospheres are an extremely rich reservoir for the isolation of a wide diversity of actinobacteria, many of them still representing a rich untapped source of bioactive secondary metabolites with potential application in different therapeutic areas and biotechnological fields.

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Modalidad: Póster

Background: Iron deficiency anaemia is one of the most global diseases nowadays. The most extended way to help to overcome this pathology is based on oral iron supplementation. These preparations are mainly composed of ferrous salts showing relatively low Fe bioavailability and increasing the risk of inflammation of the gut epithelium. The high amount of soluble iron remaining in the intestinal lumen can induce the generation of free-radicals through Fenton chemistry with the consequent harmful effect of oxidative stress. In order to overcome the existing limitations of these treatments, alternative therapy based on the development of Fe nanostructures would be an interesting strategy Objective: In this work, the evaluation of the uptake and distribution of home-synthesized small sized (4 nm core) and biocompatible (coated with tartaric/adipic acid) iron oxide nanoparticles is conducted in animal models. Methods: Synthesis of iron nanoparticles (FeNP), simulation of digestion medium (acid lability assays), intestinal perfusion experiments in Wistar rats, TEM images of tissues, and cytotoxicity and ROS production after treatment with FeNP were conducted Results and discussion: The in vitro solubility studies at different pH values (to simulate acid gastric conditions) reveals a steady-state situation in which about 50% of the nanoparticles remain as such after 90 minutes (at pH=3). Such scenario should permit the partial arrival of the nanoparticulate material in the small intestine. The absorption through the small intestine is addressed by intestinal perfusion experiments conducted with the sought nanoparticles in Wistar rats. The quantification of Fe in the NPs suspension before and after perfusion reveals Fe absorption levels above 78%. Moreover, regional differences in terms of Fe concentration were obtained among different parts of the small intestine as duodenum >jejunum >ileum. Complementary transmission electron microscopy (TEM) images showed the presence of the intact particles around the intestinal microvilli. Such high absorption levels do not seem to compromise intestinal cells viability, evaluated in enterocytes-like models (Caco-2 and HT-29) using toxicity and ROS production tests. Conclusion: These studies show the high potential of these NP preparations for their use as oral management of anaemia.

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Modalidad: Póster

Background: Iron deficiency anaemia is one of the most global diseases nowadays. The most extended way to help to overcome this pathology is based on oral iron supplementation. These preparations are mainly composed of ferrous salts showing relatively low Fe bioavailability and increasing the risk of inflammation of the gut epithelium. The high amount of soluble iron remaining in the intestinal lumen can induce the generation of free-radicals through Fenton chemistry with the consequent harmful effect of oxidative stress. In order to overcome the existing limitations of these treatments, alternative therapy based on the development of Fe nanostructures would be an interesting strategy Objective: In this work, the evaluation of the uptake and distribution of home-synthesized small sized (4 nm core) and biocompatible (coated with tartaric/adipic acid) iron oxide nanoparticles is conducted in animal models. Methods: Synthesis of iron nanoparticles (FeNP), simulation of digestion medium (acid lability assays), intestinal perfusion experiments in Wistar rats, TEM images of tissues, and cytotoxicity and ROS production after treatment with FeNP were conducted Results and discussion: The in vitro solubility studies at different pH values (to simulate acid gastric conditions) reveals a steady-state situation in which about 50% of the nanoparticles remain as such after 90 minutes (at pH=3). Such scenario should permit the partial arrival of the nanoparticulate material in the small intestine. The absorption through the small intestine is addressed by intestinal perfusion experiments conducted with the sought nanoparticles in Wistar rats. The quantification of Fe in the NPs suspension before and after perfusion reveals Fe absorption levels above 78%. Moreover, regional differences in terms of Fe concentration were obtained among different parts of the small intestine as duodenum >jejunum >ileum. Complementary transmission electron microscopy (TEM) images showed the presence of the intact particles around the intestinal microvilli. Such high absorption levels do not seem to compromise intestinal cells viability, evaluated in enterocytes-like models (Caco-2 and HT-29) using toxicity and ROS production tests. Conclusion: These studies show the high potential of these NP preparations for their use as oral management of anaemia.

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Modalidad: Póster

As part of our screening program for discovering skin-whitening natural products from extracts prepared from the broad diversity of microbial strains of Fundación MEDINA’s collection, 56 potential candidate actinobacteria strains of global biodiversity were selected to be studied using OSMAC strategy. In total 614 extracts were produced and cell-free bioassays have been used for the evaluation of their skin-whitening bioactivity.

Among the initial 614 extracts, the actinomycete strain CA-129531 of the genus Streptomyces, exhibited the most promising skin-whitening activity (i.e. tyrosinase inhibition). Preliminary study of this strain, including the scale up fermentation in 1lt and bioguided fractionation of the active EtOAc extract, led to the isolation and identification of trichostatin A and trichostatic acid.

Scale-up process optimization was performed in a bioreactor Biostat C+ (total volume 30 kg). Direct liquid/liquid extraction of the culture medium with EtOAc was performed and the yield of trichostatin A was measured in different experiments performed under modified media. The highest amount of this marker was observed when using media DNPM*3, a modified formulation of DNPM that used as carbon source dextrose. After confirming the tyrosinase inhibitory activity of the EtOAc extract of this broth (IC₅₀=63.27μg/ml), preparative HPLC was used in order to bioguided isolate the active compounds. The full set of spectroscopic data (HRMS and NMR) was recorded for all active isolated compounds in order to unambiguously elucidate their structure. One new trichostatin analogue and six known analogues have been isolated. The tyrosinase inhibitory activity, as well as the cytotoxic effect of all the isolated compounds was recorded.

Therefore, this extract can be considered as potential candidate for industrial development and this optimized small-scale process can then be transferred to pilot scale following established scale-up strategies in cosmeceutical industry.

Acknowledgements: the research work was supported by the Hellenic Foundation for Research and Innovation (HFRI) and the General Secretariat for Research and Technology (GSRT), under the HFRI PhD Fellowship grant (GA. no. 14672).

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Modalidad: Póster

Biotechnological drugs such as monoclonal antibodies or fusion proteins are currently playing a vital role in the treatment of fatal diseases such as cancer, or other types of endocrine, autoimmune and neurologic diseases. Over the past decades the production of these protein based medicines has increased significantly. Biotechnological drugs differ from traditional synthesis chemical drugs in various aspects regarding their structure, way of production, stability, characterization or the route of administration. Biotechnological drugs imply the use of living organisms such as cells, yeasts, bacteria… for their production. The application of different technologies allows changes in the microorganisms that increase the production and the extraction of new compounds. These techniques comprise conventional genetic techniques such as mutagenesis, fermentation, sexual and parasexual processes or modern techniques such as recombinant DNA techniques or the hybridoma technique. Regarding their structure, biotech drugs are higher in size and they are much more difficult to characterize. In this setting, diverse analytical techniques arise to study their complex structures in order to analyse different critical quality attributes all of them really important in both development and manufacturing: aggregation, glycosylation, oxidation, deamidation, cleavage of labile sites or phosphorylation to name a few. This attributes need to be thoroughly controlled and maintained within accepted range in order to guarantee quality, security and efficacy of medicines. Aggregates are one of the most important quality attributes that need to be controlled to ensure patient safety; impurities need to be reduced to acceptably low levels to meet the defined acceptance criteria. For mAbs, the final product should typically have less than 5% high molecular weight aggregates. DLS is a fast method and widely used in the industry for the detection of the percentages of aggregated species in solution. It gives information in the range 1nm-1μm which turns out to be important to analyse large soluble aggregates. A stability study has been performed over a period of 20 days. This technique was validated by submitting the medicine to stressing conditions. In this case: visible light irradiation, freeze-thaw cycles and temperature.

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Modalidad: Póster

Therapeutic monoclonal antibodies have become a significant addition to the pharmaceutical repertoire over the last decades, and pretend to play a more significant role in the future of pharmaceutical industry. Monoclonal antibodies have a specific conformation that allows them to bind a particular epitope of the antigen. Conformational changes due to different storage conditions such as temperature, light or shaking can alter the structure and efficacy of these biomacromolecules which can affect directly to the security of these medicines. Another important aspect of these medicines to take into account is their high cost which makes it necessary to perform physicochemical and functional studies to assess their structure and thus consider the reuse of surplus. Fluorescence spectroscopy is widely used to study peptides and proteins. The aromatic amino acids, tryptophan, tyrosine, and phenylalanine, offer intrinsic fluorescent probes of protein conformation, dynamics, and intermolecular interactions. Of the three, tryptophan is the most popular probe. Tryptophan occurs in one or a few residues in most proteins and biologically active peptides. The fluorescence of the indole chromophore is highly sensitive to environment, making it an ideal choice for reporting protein conformation changes and interactions with other molecules. In this investigation, Infliximab (Inflectra®) was chosen as the monoclonal antibody candidate to perform a conformational study when applying different stressing conditions which pretend to be detected by means of this technique. Specific stressing conditions in our study are: visible light irradiation (250 W/m2), temperature ramp (20-50^oC), guanidine solution and hypertonic medium (1.5 M in NaCl). Intrinsic tryptophan fluorescence measurements were carried out on a Cary Eclipse spectrofluorometer (Agilent, U.S.A).

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Modalidad: Póster

Resumen:

La investigación sobre el estrés es esencial en el desarrollo de proteínas terapéuticas para garantizar la calidad y la seguridad del medicamento final. Una mejor comprensión de los efectos del estrés en los procesos de agregación puede ayudar a evitar inestabilidades conformacionales y coloidales no deseadas. En este contexto, se analizaron cinco anticuerpos terapéuticos monoclonales (mAbs) comerciales: bevacizumab (BVZ), cetuximab (CTX), infliximab (IFX), rituximab (RTX) y tratuzumab (TTZ).

Metodología:

Muestras recién preparadas fueron abiertas, analizadas como control y posteriormente sometidas a diversos tipos de estrés (medio ácido, medio básicose, condiciones oxidantes H2O2 1% y 10%, y temperatura y ciclos de congelación/descongelación). La formación de agregados fue seguida por el análisis de perfiles cromatográficos de los mAbs utilizando la cromatografía líquida de exclusión por tamaños acoplada a un detector de ultravioleta visible de diodos en fila (SE-HPLC/DAD) Condiciones: fase móvil tampón fosfato 150 mM pH 7, 0,38 mL/min a temperatura ambiente, 1 uL volumen de inyección, y registro a 214 nm.

Resultados:

En igualdad de condiciones de estrés, las muestras más afectadas fueron las más diluidas (IFX 0,5 y 2 mg/mL, y RTX 1 y 4 mg/mL). A estas concentraciones, ambos mAbs se comportan de forma similar, detectando agregados tras 24 horas de calentamiento a 50^oC, la pérdida total del perfil SEC en medios ácido y básico, y la agregación en medios oxidativos. Para BVZ (25 mg/ml), se detectó agregación en todos los estreses estudiados excepto a 50^oC, donde el perfil SEC es similar al control. CTX fue el único mAb que mostró un pico en el perfil SEC debido a la rotura de las cadenas proteicas. TTZ fue claramente el más robusto frente a la degradación por estrés, a pesar de no ser el de mayor concentración (15 mg/mL), por lo que dicho resultado puede ser debida a su estructura tridimensional y/o estabilización en el medicamento Herceptin®.

BVZ (25 mg/mL), IFX (10 mg/mL) RTX (10 mg/mL) y TTZ (21 mg/mL) mostraron robustez durante tres ciclos de congelación/descongelación. CTX (5 mg/mL) fue claramente el más inestable, con pico detectado atribuible a la ruptura de las cadenas proteicas.

Conclusiones:

Los resultados mostraron que la tendencia a la agregación depende de las condiciones particulares del estrés, de la concentración y tipo del mAb, pese a que todos presentan una estructura similar de IgG1. No obstante, la concentración fue el factor determinante, a mayor concentración mayor estabilidad. Cuando hay fragmentación, esta se atribuyó probablemente a la ruptura de cisteínas entre ambas cadenas pesadas. BVZ, IFX, RTX y TTZ son robustos a los ciclos de congelación/descongelación, siendo CTX el más inestable. CTX. TTZ fue claramente el más robusto frente a la degradación por estrés, a pesar de no ser el de mayor concentración (15 mg/mL), atribuible a su estructura tridimensional y/o estabilización en el medicamento.

I Congreso de Investigadores del PTS. Granada 13-15 Feb. 2019

Modalidad: Oral

Hypertension is associated with gut microbiome dysbiosis. Blood pressure(BP) reduction by minocycline was able to rebalance the hypertension-related dysbiosis gut microbiota by reducing the Firmicutes/Bacteroidetes(F/B) ratio in angiotensin II-induced hypertension. Losartan(Los), an angiotensin receptor blocker, is a broadly use drug to hypertension. However, it is unknown whether BP reduction modifies gut microbiota composition in spontaneously hypertensive rats(SHR). The aim of this study was to evaluate if gut microbiota is involved in the antihypertensive effects of the angiotensin receptor blocker, Losartan in SHR. Twenty-weeks old Wistar Kyoto rats(WKY) and SHR were randomly assigned to three groups(n = 8): control WKY, control SHR and SHR treated with Los(20 mg/Kg/day). The treatment was given for 5 weeks. Stool samples from SHR and SHR-Los groups were homogenized and kept to perform faecal microbiota transplantation(FMT) from SHR-Los to SHR. In another experiment, twenty-weeks old SHR were randomly assigned to two groups(n=8): control SHR, and SHR treated with Hydralazine(Hyd, 25 mg/Kg/day). Los reduced systolic BP(50mmHg), improved endothelium-dependent relaxation to acetylcholine and vascular oxidative stress. The three-dimensional principal component analysis of the bacterial taxa in faecal samples showed perfect clustering among groups(WKY, SHR, SHR-Los). The F/Bratio and acetate- and lactate-producing bacteria were restored after Los treatment. In addition, the improvement of gut dysbiosis was linked to higher colonic integrity, normalization of α-defensins production, increased Tregs accumulation in mesenteric lymph nodes(MLN), and lower plasma lipopolysaccharide levels and also an improvement of the sympathetic tone in the gut. The FMT treatment from SHR-Los to SHR also reduced systolic BP(≈16 mmHg), improved endothelium-dependent relaxation to acetylcholine and vascular oxidative stress.The FMT also restored the intestinal integrity in the FMT SHR-Los group and reduce the sympathetic tone. SHR-Los FMT normalized the balance Treg-Th17 in the MLN.Hyd treatment also reduced SBP, in similar extension to that induced by losartan, reduced left ventricular hypertrophy, improved the endothelium-dependent relaxation to acetylcholine and reduced the vascular NADPH oxidase activity.By contrast, hydralazine significantly increased heart rate and did not improve the intestinal integrity, gut dysbiosis and gut sympathetic tone. An unclear separation was observed in the PCA between the 2 clusters, representing the microbial compositions of SHR and SHR-Hyd groups.In addition, the F/Bratio, the proportion SCFAs-producing bacteria and the percentage of strict anaerobic bacteria were similar between both groups, showing that hydralazine did not alter gut dysbiosis. In conclusion, Los improve the intestinal dysbiosis due to a reduction in the sympathetic tone, that effect on the gut microbiota is partly responsible for its antihypertensive effect.

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Modalidad: Póster

La curcumina es un pigmento polifenólico hidrófobico contenido en la raíz de la Cúrcuma longa que se cultiva ampliamente en el continente asiático y donde se utiliza como especia y también como medicamento para la cura de muchas enfermedades. Por sus propiedades antioxidantes, actúa frente a las células madre cancerígenas (las responsables de las recidivas y recaídas del tumor) modulando para ello factores de crecimiento, factores de transcripción, citoquinas, enzimas y genes que regulan la proliferación celular y la apoptosis.

En este trabajo se da cuenta de la modificación estructural de la curcumina protegiendo los grupos hidróxilos de sus anillos fenólicos con diferentes grupos bencilsulfónicos, obteniéndose dos compuestos análogos.

La estructura final de los compuestos obtenidos ha sido confirmada mediante análisis 1H-RMN, 13C-RMN, DEPT, HSQC, HMBC y difracción de rayos X del monocristal. Además se ha llevado a cabo un estudio fotofísico donde se comparan los espectros de fluorescencia de emisión y de excitación y el análisis de tiempo de vida de fluorescencia de la curcumina con los valores obtenidos de los respectivos ánalogos, tomando la fluoresceína como fluoróforo de referencia. Se ha podido observar que las modificaciones realizadas en la curcumina han incrementado las propiedades fluorescentes de la molécula de partida, por lo que estos compuestos pueden ser útiles para su aplicación en técnicas de microscopía basadas en tiempos de vida de fluorescencia.

Los ensayos biológicos en células madre cancerígenas confirman que las modificaciones estructurales realizadas en la molécula de la curcumina conllevan a un aumento de la actividad antitumoral respecto a la molécula original.

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Modalidad: Oral

La exposición prolongada a infecciones, lesiones, tóxicos y enfermedades inflamatorias idiopáticas puede promover el desarrollo de fibrosis crónica. Dicha fibrosis consiste, básicamente, en la deposición de un exceso de matriz extracelular, lo que provoca alteraciones morfológicas y funcionales en el órgano afectado. Pese a que las enfermedades asociadas a fibrosis constituyen un 45% de las muertes que se producen a nivel mundial, a día de hoy no se han desarrollado tratamientos dirigidos, siendo las terapias actuales de carácter sintomatológico. Esto hace necesario la búsqueda de nuevos fármacos capaces de detener el proceso de fibrosis tardía e incluso de revertirlo. En ese sentido nuestro grupo investiga el potencial efecto terapéutico del neuropéptido inmunomodulador Cortistatina (CST). Más allá de su papel como agente antiinflamatorio, existen evidencias que sugieren su potencial papel en la regulación de la fibrosis. Así, usando varios modelos experimentales preclínicos de fibrosis crónica en piel (esclerodermia), pulmón (fibrosis pulmonar idiomática) e hígado (fibrosis hepática tóxica y colestática), encontramos que ratones con deficiencia parcial (CST-HET) o total (CST-KO) de CST presentaron respuestas fibróticas más severas que las mostradas en animales con una dotación genética normal de CST (CST-WT), lo que se tradujo en un aumento en las tasas de mortalidad y fallo orgánico. Estos resultados indicaban que CST era un regulador endógeno del proceso fibrótico asociado a daño tisular. Utilizando estos mismos modelos murinos de fibrosis ensayamos el potencial efecto terapéutico de CST, independientemente de su acción antiinflamatoria. Observamos que la administración, tanto local como sistémica, de este neuropéptido mejoró significativamente los signos histopatológicos y marcadores fibróticos típicos de estas enfermedades. Para entender los mecanismos por los cuales CST pudiese estar regulando el proceso fibrótico se obtuvieron fibroblastos primarios procedentes de piel y pulmones de ratones CST-WT, CST-HET y CST-KO. Los resultados mostraron que en ausencia de CST, los fibroblastos expresan mayor activación de rutas de señalización intracelulares profibróticas (ej. forma fosforilada de Smad2/3 y Akt) y marcadores/mediadores fibróticos exacerbados, tanto a nivel basal como tras estimulación profibrótica. Estos datos sugieren un papel de CST en la regulación de la activación de células efectoras fibrogénicas. Sin embargo, resultados preliminares sobre la falta de efecto significativo de CST exógeno en fibroblastos activados, podría indicar un efecto indirecto sobre los mismos. En resumen, CST emerge como un regulador endógeno de la fibrosis y un candidato atractivo para el tratamiento de las patologías relacionadas con los procesos fibróticos crónicos y el desarrollo de fármacos dirigidos a los mismos.

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Modalidad: Póster

Monoclonal antibodies (mAb) as well as fusion proteins represent the largest and fastest growing product within the group of therapeutic proteins. Currently there are more than 25 monoclonal antibodies (i.e. Adalimumab (Humira®), Pembrolizumab (Keytruda®), Infliximab (Remicade®), Bevacizumab (Avastin®), Cetuximab (Erbitux®), etc.) approved by the different Regulatory Agencies and several others are actually developing. All approved mAbs belong to the immunoglobulin G, particularly to the type IgG, and most of them have IgG1 structure. Despite the high quality of these drugs, the immunogenicity of proteins is a point of concern. The presence of structural alterations such as changes in secondary or tertiary structure, aggregates formation, etc. represents a Critical Quality Attribute (CQA) that directly affects the risk of non-desired immune responses.

The production of mAbs is a process in which several CQAs are identified that directly affect the stability and functionality. Therefore, in the development of these drugs the application of Process Analytical Technologies (PAT) to ensure quality standards is highly recommended. In this context, the strategy of Quality by Design (QbD) ensure optimal mAbs development and manufacturing. . In this way, reliable limits or margins can be established for the different CQAs throughout the production process that will ensure a final quality of the product that conforms to the standards set in the International Council for Harmonisation of Technical Requirements for Pharmaceuticals for Human Use (ICH) guidelines. Also stability studies along time in hospital conditions of use could benefit from these strategies.

Secondary structural stability is a CQA since any structural change could produce negative impact on the efficacy and safety of the final medicine. Secondary structural stability is a CQA since any structural change could produce negative impact on the efficacy and safety of the final medicine. In the present communication the characterization of the secondary structure of the mAb Rituximab in the innovative medicine (Mabthera®) and their thermal stability by circular dichroism spectropolarimetry (CD) is presented. CD spectra can be readily used to estimate the fraction of a molecule that is in the alpha-helix conformation, the beta-sheet conformation and the beta-turn conformation. The capacity of CD to give a representative structural signature makes it a powerful tool in modern biotechnology with analytical applications.

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Modalidad: Póster

The blood-brain barrier, which is one of the tightest barriers in the body, protects the brain from insults, such as infections. Nonetheless, a range of pathogenic microbes are able to invade the central nervous system CNS, and the resulting infections such as encephalitis and meningitis cause significant morbidity and mortality. In terms of potential exposure in the worldwide population, parasitic infections, including toxoplasmosis, malaria, African trypanosomiasis, echinococcosis, neurocysticercosis, malaria and schistosomiasis are the greatest threat. Treating brain diseases is frequently associated with failure because of the physical impediment exerted by the the blood-brain barrier (BBB), making drugs difficult to reach the disease lesions at effective doses.

Searching for new strategies to treat African trypanosomiasis we developed a drug delivery system to treat the acute phase of the disease: a drug transporter consisting in polymeric nanoparticles conjugated with a single-domain antibody derived from camel heavy-chain antibodies (termed nanobody NbAn33)1-2, that specifically recognizes conserved cryptic epitopes on the parasite surface3. In vitro and in vivo studies demonstrated that the nanodevice reduced the curative dose of pentamidine about 100 fold. However, the effectiveness of this nanocarrier in the encephalitic stage of the disease has not been evaluated.

Transcytosis is the process by which the epithelial cells of the blood-brain barrier transport macromolecules across the interior of a cell and expel them on the other side. Thus, transcytosis provides the means for brain delivery of drugs across the blood-brain barrier. Receptors of transferring and LDL represent the majority of the receptors present in endothelial cell of the blood-brain barrier. In this sense, we have modified NbAn33 fusing a peptide corresponding to the ligand of LDL receptor to the amino terminal end of the nanobody. Our results showed an increase in the penetrance through the BHE of the modified Nb33_LDL in comparison with the Nb33 alone.

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Modalidad: Póster

Introduction

Microbial natural products continue to play an invaluable role in the discovery and development of the chemotherapeutic arsenal (1). During our ongoing discovery programs with actinobacteria we isolated three new 36-membered macrolactones containing unusual structural features which showed broad-spectrum antifungal activity.

Objectives

In order to identify the biosynthetic gene cluster (BGC) responsible for the biosynthesis of these new bioactive compounds the genome of the producing Streptomyces strain was fully sequenced using Illumina HiSeq 2500 and PacBio.

Results and significance of the work

The BGC of the macrolactones was identified based on the prediction of the polyketide ring biosynthesised by the type I modular polyketide synthases encoded within the gene cluster and the overall similarity of the BGC with the gene cluster responsible for the biosynthesis of the closely related PM100117/PM100118 macrolactones (2). In-depth in silico analysis of the KR and ER domains from the type I polyketide synthases was carried out in order to propose the absolute stereochemistry of the polyketide ring (3), which was in good agreement with the predicted relative stereochemistry obtained from the analysis of the NMR data. Taken together these data allow us to propose the absolute stereochemistry of these family of new compounds. A biosynthetic pathway for the naphthoquinone unit and the two carbohydrate units which decorate the polyketide ring is also proposed based in the in silico analysis of the biosynthetic genes found in the cluster together with the proposed route for the biosynthesis of the related PM100117/PM100118 macrolactones.

(1) D. J. Newman and G. M. Cragg, J. Nat. Prod. 2012, 75, 311-335

(2) R. García-Salcedo, C. Olano, C. Gómez, R. Fernández, A. F. Braña, C. Méndez, F. de la Calle and J. A. Salas, Microb. Cell Fact. 2016, 15, 44-62

(3) A. T. Keatinge-Clay, Chem. Biol. 2007, 14, 898-908

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Modalidad: Póster

Muchos medicamentos tanto de síntesis química como biológica presentan dificultades para llegar a su diana terapéutica. Tanto por su degradación o como por su incapacidad de atravesar ciertas barreras biológicas no pueden llegar a ejercer su efecto haciendo imposible llevar a cabo un tratamiento adecuado sobre el paciente. El uso de nanopartículas como sistemas de transporte de fármacos se presenta como una posible buena opción frente a estas limitaciones planteadas. En el poster presentado, nanopartículas de hialuronato sódico fueron preparadas mediante el método de gelificación iónica en el seno de una emulsión. Además, dichas nanopartículas fueron recubiertas con chitosán y glicerol tripalmitina con el objetivo de mejorar sus capacidades de penetración a través de membranas biológicas. Las nanopartículas son caracterizadas por tamaño, forma y carga eléctrica superficial, demostrando en todos los casos analizados, parámetros afines a su objetivo en el transporte de fármacos en el organismo.

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Modalidad: Póster

A reinvestigation of extracts of a Streptomyces strain (CA-091830), producer of the imipenem potentiator krisynomycin (1) resulted in the isolation of two additional analogues with different chlorination patterns that we designated krisynomycins B and C. The structures of the new molecules were determined using a combination of 1D and 2D NMR data, HRMS and ESI-qTOF-MS/MS. None of the krisynomycins had antibacterial activity when tested alone (MICs above 64-128 μg/mL), but they were found to significantly potentiate imipenem activity when methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) was exposed to a sub-inhibitory concentration of the drug (4 μg/mL, MIC 16-32 μg/mL) in the presence of different concentrations of the three krisynomycins. Concentrations of the three compounds in the range 1-16 μg/mL caused a growth inhibition of MRSA above 90% in combination with the sub-inhibitory concentration of imipenem. An increased number of chlorine atoms in the krisynomycin family seems to improve the synergistic effect of imipenem activity.

(1) Therien A G, Huber J L, Wilson K E, Beaulieu P, Caron A, Claveau D, Deschamps K, Donald R G K, Galgoci A M, Gallant M, Gu X, Kevin N J, Lafleur J, Leavitt P S, Lebeau-Jacob C, Lee S S, Lin M M, Michels A A, Ogawa A M, Painter R E, Parish C A, Park Y-W, Benton-Perdomo L, Petcu M, Phillips J W, Powles M A, Skorey K I, Tam J, Tan C M, Young K, Wong S, Waddell S T, Miesel L. Antimicrob. Agents Chemother. 2012, 56, 4662-4670.

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Modalidad: Póster

Actualmente las proteínas terapéuticas más importante por su desarrollo e implantación en el mercado son los anticuerpos monoclonales (AcMo). Por sus características, son idóneos para ser empleados principalmente en el tratamiento de enfermedades como el cáncer y enfermedades autoinmunes, todas de gran prevalencia mundial.

Los AcMo son grandes glicoproteínas de alta complejidad y gran tamaño. De los diversos tipos de anticuerpos, los IgG1 son los más empleados con fines terapéuticos. Estos se caracterizan por tener un peso molecular alrededor de 150 kDa), estan compuestos por cuatro cadenas polipeptídicasdos de ellas dos pesadas de unos 50 kDa y dos ligeras de unos 25 kDa aprox). Son monómeros con una conformación tridimensional en forma de “Y” mantenida por dieciséis puentes disulfuro junto con interacciones no covalentes. Desde el punto de vista funcional, presntan una región variable, denominada fab, que es la responsable de la unión específica al antígeno (en este caso a su diana terapéutica), y una región constante, la Fc, que es común a los anticuerpos. También, y como modificación post-transduccional (PMT), a la estructura proteica de se le unen cadenas de azúcares denominados glicanos, responsables de efectos importante tanto en su actividad como en su eficacia desde el punto de vista terapéutico.

La estructura dinámica de los AcMo hace tengan una tendencia natural a formar agregados. En disolución, la exposición de los residuos de aminoácidos hidrofóbicos con el medio acuoso provoca la interacción entre entidades de proteína y forman estructuras de orden mayor. El proceso de agregación representa graves problemas en los biofármacos debido a que induce respuesta inmunológica grave. El proceso de agregación tiene que ser contralado en cualquier etapa, desde las etapas iniciales de desarrollo hasta su administración. En los últimos años se ha desarrollado técnicas analíticas cromatografías acopladas a espectrometría de masas de alta resolución que permiten la detección e identificación de los agregados de AcMo en condiciones nativas, sin desnaturalizar. En este trabajo se presenta un estudio del perfil de agregación en modo nativo obtenido por cromatografía liquida de exclusión molecular -(SE)UHPLC-, acoplada a un detector de masas de alta resolución y masa exacta -(Orbitrap)-HRMS.

Para este estudio se ha empleado adalimumab -principio activo de Hurmira®- AcMo humano recombinante expresado en células de ovario de hámster chino comercializado como solución inyectable, para ser suministrado por vía subcutánea para el tratamiento tanto en adultos como en niños de artritis reumatoide, artritis idiopática juvenil, psoriasis, enfermedad de Crohn etc. Es un anti TNFα (tumor necrosis factor α).

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Modalidad: Oral

Los anticuerpos monoclonales (mAb) son una clase emergente de fármacos que constituyen, actualmente, el grupo más importante de proteínas terapéuticas, tanto en el mercado como en fase de desarrollo. Los mAbs son empleados mundialmente en el tratamiento de enfermedades de gran prevalencia, como el cáncer y enfermedades autoinmunes.

Desde un punto de vista estructural son grandes glicoproteínas (generalmente de tipo IgG1, pero no excluyente) de alta complejidad y gran tamaño (150 kDa aprox). Están compuestos por cuatro cadenas polipeptídicas: dos pesadas (50 kDa aprox.) y dos ligeras (25 kDa aprox). Contienen dieciséis puentes disulfuro que, junto con interacciones no covalentes conforman una estructura tridimensional en forma de "Y". Funcionalmente hay una región variable (fab), responsable de la unión al antígeno, y una región constante (Fc) común a todos los anticuerpos. A la estructura proteica de los mAb se unen cadenas de azúcares denominados glicanos que pueden tener efectos significativos en su actividad y eficacia como terapéutico. Además, existen otras modificaciones postraslacionales (PTM) de diversa naturaleza que se producen durante el proceso de desarrollo y fabricación, e incluso durante la vida útil de los mismos. Estas modificaciones, aumentan la complejidad de su caracterización estructural, imprescindible en cualquier etapa desde su desarrollo ya que están directamente relacionadas con su funcionalidad.

La elevada heterogeneidad -debida a las PTM- de estos biofármacos, se traduce en una alta complejidad de los estudios que necesiten abordar la estructura y funcionalidad de los mAbs. Mediante técnicas analíticas de alta resolución es posible la detección e identificación de las entidades proteicas (denominadas isoformas) que conforman el principio activo de estos medicamentos biotecnológicos. En este trabajo se muestra como pueden ser evaluada la heterogeneidad de los mAbs -glicoformas y PTM-, en cualquier etapa de su desarrollo o vida útil, mediante cromatografía líquida de intercambio iónico fuerte -(SCX)UHPLC- acoplada a un detector de masas de alta resolución y masa exacta -(Orbitrap)-HRMS- y todo ello en modo nativo, permitiendo así evaluar las isoformas sin provocar desnaturalización del mAb.

Para este estudio se ha empleado adalimumab, principio activo de Hurmira®, es un mAb humano recombinante expresado en células de ovario de hámster chino comercializado como solución inyectable, para ser suministrado por vía subcutánea directamente desde la jeringa. Se usa para el tratamiento tanto en adultos como en niños de artritis reumatoide, artritis idiopática juvenil, psoriasis, enfermedad de Crohn y uveítis. Actúa uniéndose al factor de necrosis tumoral (TNF), de manera que inhibe su actividad impidiendo así que se una a determinados receptores de la superficie celular que desencadenan la reacción indeseada en el organismo.

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Modalidad: Póster

MEDINA is a Research Organization established in Granada (Spain) as a private-public partnership. MEDINA’s main objective is to discover molecules with attractive biological and chemical properties amenable to industrial exploitation. During the last years, MEDINA has developed cutting-edge tools to identify valuable natural or synthetic chemicals through a complete HTS workflow that involves robotic handling, HTS, HCS and bio-informatic solutions that process, store, and manage the experimental data, focusing on research areas such as cancer, neurodegenerative diseases and rare diseases. MEDINA offers a customized development of throughput automated HCS assay based on client’s needs and develops internal and collaborative projects. Some examples of drug discovery screening campaigns conducted both with extracts of Microbial Natural Products and with synthetic compounds are: i) the search for antitumor compounds in the nuclear translocation-based assay with NES and FOXO fluorescence fusion proteins and ii) mitochondrial health assay in the search for antiparkinsonian compounds.

Additionally, in the safety platform has been included the genotoxicity test In vitro Cell Micronucleus Test (MNT) (TG487 OCDE), performed by high-content-imaging acquisition and analysis using the application developed in-house, NucleusFinder, which significantly improves the test, simplifying counting and improving accuracy and automation.

These primary screens and safety assays are part of the Screening Platform at MEDINA where HTS and HCS are integrated for performing both internal screenings and collaborations, and on-demand projects using the technology and know-how acquired from many years of research.

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